Pejouhesh dar Pezeshki (Research in Medicine)

fa بررسی تأثیر ال- آرژنین بر القای کلونی‌زایی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند در محیط آزمایشگاه Evaluation of the Effect of L- arginine on Induction of Ovine Spermatogonial Stem Cells Colonization In-Vitro علوم سلولی( سلولی مولکولی، سلول های بنیادی) Cellular Sciences (Molecular Cells, Stem Cells) پژوهشی Original سابقه و هدف: سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی دارای توانایی خودنوسازی و تمایز بوده و میتوانند صفات ژنتیکی را به نسل بعدی منتقل کنند. بنابراین ایجاد محیط کشت مناسب برای این رده سلولی مهم است. هدف از مطالعه حاضر بررسی تأثیر غلظتهای مختلف ال- آرژنین بر کلونی‌زایی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی گوسفند در محیط آزمایشگاه بود. روش کار: نوع مطالعه حاضر تجربی بود. پنج بار نمونهگیری و تکرار آزمایش انجام شد. سلول‌های اسپرماتوگونی طی دو مرحله هضم آنزیمی از بیضه بره‌های نابالغ جداسازی شدند. سلول‌ها به مدت 10 روز در شش گروه آزمایشی کشت داده شدند. برای گروه کنترل، کشت ساده سلول‌های اسپرماتوگونی در محیط DMEM حاوی یک درصد آنتی‌بیوتیک و 5 درصد FBS انجام شد. در گروههای تیمار 1، 2، 3، 4 و 5 نیز غلظتهای مختلف ال- آرژنین (50، 100، 200، 500 و 1000 میکرومول بر لیتر) به ترتیب به محیط کشت اضافه شد. تعویض محیطهای کشت هر سه روز یک‌بار انجام شد. ماهیت سلول‌ها با رنگ‌آمیزی ایمنوسیتوشیمی علیه آنتیژنهای PGP9.5 و PLZF تأیید شد. بلافاصله پس از جداسازی، درصد زندهمانی سلولها، تعداد و مساحت کلونی‌های تشکیل شده در روزهای 4، 7 و 10 پس از کشت، توسط میکروسکوپ معکوس ارزیابی شدند. دادهها توسط آزمون واریانس یکطرفه آنالیز شدند. سطح معنا‌داری 0/05>P در نظر گرفته شد. یافته‌ها: نتایج نشان دادند که میزان زنده‌مانی سلول‌های اسپرماتوگونی پس از جداسازی 1/4 ± 89/28درصد بود. سلول‌های استخراج‌شده آنتیژنهای PGP9.5 و PLZF را بیان کردند. همچنین در روز 10 پس از کشت و در تیمار 4 (200 میکرومول بر لیتر ال- آرژنین)؛ تعداد (21/1± 160/8) و مساحت (3/1 ± 4/5) کلونی‌های سلول‌های اسپرماتوگونی افزایش معنا‌داری در مقایسه با سایر گروه‌ها داشت (0/05>P). نتیجه‌گیری: به نظر میرسد افزودن ال- آرژنین با دوز 200 میکرومول بر لیتر تاثیر مثبتی بر القای کلونیزایی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی دارد و میتواند محیط کشت مناسبی را در محیط آزمایشگاه فراهم کند.   Background and Aim: Spermatogonial stem cells have the ability to self-renewal and differentiation and can transmit genetic traits to the next generation. Therefore, establishing an appropriate culture medium for this cell line is important. The aim of this study was to determine the effect of different concentrations of L-arginine on sheep spermatogonial stem cells colony formation in-vitro. Methods: An experimental study was conducted. Each treatment was replicated five times. Spermatogonial cells were isolated from prepubertal lamb’s testis using two-step enzymatic digestion. The cells were cultured for ten days in six groups. In the control group, a simple culture of spermatogonial cells was performed in DMEM containing 1% antibiotics and 5% FBS. In the treatment groups 1, 2, 3, 4, and 5 different concentrations of L-arginine (50, 100, 200, 500, and 1000 μmol/L), was added to the culture medium, respectively. The culture media were changed every three days. Identification of cells was confirmed by immunocytochemical staining against PGP9.5 and PLZF antigens. Immediately after isolation, the percentage of cells viability, number, and surface area of colonies formed on the 4th, 7th, and 10th days after the culture, were assessed by an inverted microscope. Data were analyzed using one- way ANOVA test. P<0.05 was considered statistically significant. Results: The findings indicated that the viability rate of spermatogonial cells after isolation was 89.28 ± 1.4%. Isolated cells expressed PGP9.5 and PLZF antigens. Also, on day 10 after culture and in treatment 4 (200 μmol/L L- arginine); the number (160.8 ± 21.1) and surface area (5.4 ± 1.3) spermatogonial cells colonies had a significant increase compared to other groups (P<0.05). Conclusion: It seems that the addition of L- arginine at a dose of 200 μmol/L has a positive effect on the induction of spermatogonial stem cells colonization and can provide an appropriate culture medium in vitro.   سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی؛ گوسفند؛ ال- آرژنین؛ کشت سلول Spermatogonial Stem Cells, Sheep, L-arginine, Cell Culture 15 25 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3834-2&slc_lang=fa&sid=1 Zahra Ghaderi Nazliani زهرا قادری نازلیانی 100319475328460027919 100319475328460027919 No Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Razi University, Kermanshah, Iran. گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران. Peyman Rahimi-Feyli پیمان رحیمی فیلی drp.rahimi@gmail.com 100319475328460027920 100319475328460027920 Yes Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Razi University, Kermanshah, Iran. گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران. Ali Asghar Moghaddam علی اصغر مقدم 100319475328460027921 100319475328460027921 No Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Razi University, Kermanshah, Iran. گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران. Samad Alimohammadi صمد علی محمدی s.alimohammadi@razi.ac.ir 100319475328460027922 100319475328460027922 No Department of Basic Sciences, Section of Physiology, Faculty of Veterinary Medicine, Razi University, Kermanshah, Iran. گروه علوم پایه، بخش فیزیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه رازی، کرمانشاه، ایران.