Pejouhesh dar Pezeshki (Research in Medicine)

fa ارزیابی اثرات ضد قارچی و ضدبیوفیلمی پپتید Hyde C1 بر کاندیدا آلبیکنس Evaluation of the Antifungal and Antibiofilm Effects of Hyde C1 Peptide on Candida albicans قارچ شناسی Mucology پژوهشی Original <div style="text-align: justify;">سابقه و هدف: افزایش مقاومت دارویی کاندیدا آلبیکنس به داروهای رایج، ضرورت شناسایی ترکیبات ضدقارچی جدید را افزایش داده است. پپتید Hyde C1 مشتق از گیاه کاسنی، پیش‌تر دارای فعالیت ضدباکتریایی گزارش شده است، اما اثر ضدقارچی و مکانیسم احتمالی آن علیه کاندیدا آلبیکنس کمتر بررسی شده است. این مطالعه با هدف ارزیابی اثر ضدقارچی و ضدبیوفیلمی پپتید Hyde C1 و بررسی نقش آسیب غشایی و تولید گونه‌های فعال اکسیژن انجام شد. روش کار: این پژوهش یک مطالعه تجربی آزمایشگاهی از نوعin vitro  بود. فعالیت ضدقارچی پپتید علیه سویه استاندارد کاندیدا آلبیکنسATCC 10231  و پنج سویه بالینی با روش رقت در محیط مایع بررسی شد. برای ارزیابی مکانیسم اثر، آزمون‌های نشت پروتئین، رنگ‌آمیزی پروپیدیوم آیوداید همراه با فلوسایتومتری، سنجش ROS با DCFH-DA و مهار بیوفیلم به روش کریستال ویوله انجام شد. داده‌ها با نرم‌افزارGraphPad  Prism نسخه ۸ و آزمون ANOVA یک‌طرفه تحلیل شدند. یافته‌ها: پپتید Hyde C1 علیه تمامی سویه‌های مورد بررسی فعالیت ضدقارچی نشان داد. مقادیر MIC در محدوده ۸ تا ۳۲ میکروگرم بر میلی‌لیتر و مقادیر MFC در محدوده ۱۶ تا ۶۴ میکروگرم بر میلی‌لیتر قرار داشت. تیمار سلول‌های کاندیدا آلبیکنس با پپتید موجب افزایش وابسته به غلظت و زمان در نشت پروتئین‌های درون‌سلولی شد؛ به‌طوری‌که در غلظت‌های×MIC 1 و ×MIC2، میزان نشت پروتئین نسبت به گروه کنترل به‌طور معنی‌داری افزایش یافت (0/001 > P). نتایج رنگ‌آمیزی پروپیدیوم آیوداید نشان داد که درصد سلول‌های دارای آسیب غشایی در غلظت‌های×MIC 1 و×MIC 2 به‌ترتیب به 22/6% و 48/5% رسید. همچنین، تیمار با پپتید موجب افزایش تولید گونه‌های فعال اکسیژن شد و درصد سلول‌های ROS-positive در غلظت‌های ×MIC1 و×MIC 2 به‌ترتیب به ۴۴% و 68/2% افزایش یافت. پپتید Hyde C1 تشکیل بیوفیلم را نیز به‌صورت وابسته به غلظت مهار کرد؛ به‌طوری‌که در غلظت ۸ میکروگرم بر میلی‌لیتر، مهار بیوفیلم 34/6درصد بود (0/05 > P) و در غلظت‌های ۱۶، ۳۲ و ۶۴ میکروگرم بر میلی‌لیتر، میزان مهار به‌ترتیب به 62/3، 81/5و 87/2درصد رسید (0/001 > P). نتیجه‌گیری: پپتید Hyde C1 دارای فعالیت ضدقارچی و ضدبیوفیلمی علیه کاندیدا آلبیکنس است و احتمالاً از طریق آسیب غشایی و القای استرس اکسیداتیو اثر می‌گذارد.</div> <div style="text-align: justify;">Background and Aim: The increasing resistance of Candida albicans to commonly used antifungal agents has highlighted the need to identify new antifungal compounds. Hyde C1 peptide, derived from chicory, has previously been reported to possess antibacterial activity; however, its antifungal effects and possible mechanisms of action against C. albicans have been less investigated. This study aimed to evaluate the antifungal and antibiofilm effects of Hyde C1 peptide and investigate the potential roles of membrane damage and reactive oxygen species production. Methods: This was an experimental, laboratory- based in vitro study. The antifungal activity of the peptide against the standard strain C. albicans ATCC 10231 and five clinical isolates was evaluated using the broth microdilution method. To assess its mechanism of action, protein leakage assay, propidium iodide staining followed by flow cytometry, ROS measurement using DCFH-DA, and biofilm inhibition assay using the crystal violet method were performed. Data were analyzed using GraphPad Prism version 8 and one-way ANOVA. Results: Hyde C1 peptide showed antifungal activity against all tested C. albicans strains. The MIC values ranged from 8 to 32 µg/ mL, and the MFC values ranged from 16 to 64 µg/ mL. Treatment of C. albicans cells with the peptide caused a concentration- and time- dependent increase in intracellular protein leakage; protein leakage was significantly increased at 1×MIC and 2×MIC compared with the untreated control group (P < 0.001). Propidium iodide staining showed that the percentage of membrane- damaged cells reached 22.6% and 48.5% following treatment with 1×MIC and 2×MIC, respectively. Moreover, Hyde C1 increased intracellular reactive oxygen species production, with ROS-positive cells increasing to 44% and 68.2% at 1×MIC and 2×MIC, respectively. The peptide also inhibited C. albicans biofilm formation in a concentration-dependent manner. Biofilm inhibition was 34.6% at 8 µg/ mL (P < 0.05), increasing to 62.3%, 81.5%, and 87.2% at 16, 32, and 64 µg/ mL, respectively (P < 0.001). Conclusion: Hyde C1 peptide exhibits antifungal and antibiofilm activity against C. albicans and may exert its effects through membrane damage and induction of oxidative stress.</div> پپتید Hyde C1, فعالیت ضدقارچی, کاندیدا آلبیکنس, گونه‌های فعال اکسیژن (ROS), بیوفیلم, مقاومت دارویی, استرس اکسیداتیو, پپتید ضدمیکروبی Hyde C1 peptide, Antifungal activity, Candida albicans, Reactive oxygen species, Biofilm, Drug resistance, Oxidative stress, Antimicrobial peptide 0 0 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5119-1&slc_lang=fa&sid=1 Atefeh Nikzad Alamshiri عاطفه نیکزاد المشیری tefehnikzad1367@gmail.com 100319475328460033794 100319475328460033794 No Department of Biology, QaS.C., Islamic Azad University, Qaemshahr, Iran. گروه زیست‌شناسی، واحد قائم‌شهر، دانشگاه آزاد اسلامی، قائم‌شهر، ایران. Sima Sadat Seyedjavadi سیما السادات سیدجوادی sima_seyedjavadi@yahoo.com 100319475328460033795 100319475328460033795 Yes Department of Mycology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. گروه قارچ‌شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران. Fatemeh Fatemeh Peyravii Ghadikolaii فاطمه پیروی قادیکلایی peyravii57@iau.ac.ir 100319475328460033796 100319475328460033796 No Department of Biology, QaS.C., Islamic Azad University, Qaemshahr, Iran. گروه زیست‌شناسی، واحد قائم‌شهر، دانشگاه آزاد اسلامی، قائم‌شهر، ایران. Mehdi Goudarzi مهدی گودرزی 100319475328460033797 100319475328460033797 No Department of Microbiology, School of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه میکروب‌شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران.