چکیده سابقه و هدف: منطقه II غنی از سیستئین پروتئین متصل شونده به دافی در پلاسمودیوم ویواکس (PvDBP-II) نقشی اساسی در حمله مروزوئیت‌های انگل به اریتروسیت‌های انسان ایفا می‌نماید. به همین دلیل این پروتئین به عنوان پروتئین کاندید واکسن در بررسی پاسخ‌های ایمونولوژیکی مورد نظر محققین است. هدف از این مطالعه بیان پروتئین مذکور به میزان بالا با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی است. روش بررسی: پس از کلونینگ PvDBP-II در وکتور pGEM T easy، ساب کلونینگ در وکتورهای بیانی pET28a، pET24d و pQE30 انجام و بیان پروتئین در سویه‌های BL21(DE3) و M15(pREP4) اشرشیا کلی که محتوی ساختارهای بیانی ذکر شده بودند، تحت شرایط متفاوت ازجمله محیط کشت، دمای انکوباسیون و زمان‌های مختلف، بیان پس از القاء مورد بررسی قرار گرفت. خالص سازی به کمک روش متال افینیتی کروماتوگرافی تحت شرایط احیاء صورت گرفت و محصول توسط روش‌های SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ مورد تائید قرار گرفت. در نهایت غلظت پروتئین خالص شده توسط دستگاه اسپکتروفتومتر در طول موج 280 نانومتر اندازه گیری شد. یافته‌ها: بیان rPvDBP-II 4 ساعت پس از القاء با IPTG 1میلی مولار در دمای 37 درجه سانتی گراد در محیط LB2x و با استفاده از سیستم بیانی M15-pQE30 به میزان قابل قبولی صورت گرفت ولی در دو سیستم بیانی BL21-pET28a و BL21-pET24d، بیان پروتئین مورد نظر به مقدار بسیار کم 200 مشاهده گردید. سایز پروتئین نوترکیب حاصل بر روی ژل طبق انتظار 47 کیلودالتون (اسید آمینه 588-198) بود. وسترن بلاتینگ با استفاده از آنتی بادی های anti-His و سرم افراد مبتلا به عفونت پلاسمودیوم ویواکس موید بیان PvDBP-II بود و غلظت پروتئین حاصل 1200 میکروگرم در میلی‌لیتر ارزیابی شد. نتیجه‌گیری: در این مطالعه با استفاده از سیستم بیانی پروکاریوتی E. coli (M15/BL21) و با انجام حداقل مراحل ترانسفورمیشن موفق به افزایش چشمگیر میزان بیان و دسترسی به فرم خالص و نوترکیب PvDB-II بدون نیاز به انجام آزمایشات پیچیده و گران قیمت شدیم که این امر می‌تواند در طراحی واکسن منطقه‌ای علیه مالاریای ویواکس بسیار مفید و کارآمد باشد. واژگان کلیدی: پلاسمودیوم ویواکس، پروتئین متصل شونده به دافی، بیان، سیستم بیانی pQE30، E. coli.

واژه‌های کلیدی: واژگان کلیدی: پلاسمودیوم ویواکس، پروتئین متصل شونده به دافی، بیان، سیستم بیانی pQE30، E. coli.

متن کامل [PDF 367 kb]   (11128 دریافت)