سابقه وهدف: عفونت گوش میانی یکی از بیماری های شایع در میان کودکان میباشد.عوامل مختلفی از جمله باکتری ها و ویروس ها عامل ابتلا به عفونت گوش میانی هستند. شایع ترین باکتری های پاتوژن استرپتوکوکوس پنومونیه، هموفیلوس آنفلوانزا، موراکسلاکاتارالیس و استرپتوکوکوس پیوژن هستند.اخیرا الویوکوکوس اوتیتیدیس به عنوان یکی از عوامل ایجاد کننده ی این عارضه شناخته شده است که مطالعات محدودی به علت سخت رشد بودن و دشواری نمونه گیری بر روی این باکتری صورت گرفته است. در این مطالعه بررسی باکتریهای سخت رشد در بیماران مبتلا به اوتیت میانی به دو روش فنوتیپی و ژنوتیپی انجام شده است. مواد و روش ها: این مطالعه از نوع توصیفی به مدت 5 ماه از اسفند ماه سال 1392 لغایت تیر ماه سال 1393 و بر روی 50 بیمار مراجعه کننده به بیمارستان امیراعلم تهران صورت گرفت. نمونه های اخذ شده سپس تحت بررسی های فنوتیپی و ژنوتیپی قرار گرفتند. یافته ها: در این مطالعه به وسیله کشت نمونه ها، تعداد 3 جدایه(6%) آلویوکوکوس اوتیتیدیس، 3 جدایه (6%) هموفیلوس آنفولانزه و 1 جدایه (2%) موراکسلا کاتارالیس جداسازی شد. بوسیله تکنیک Multiplex PCR، 25 مورد آلویوکوکوس اوتیتیدیس (50%)، 28 مورد هموفیلوس آنفولانزه (56%) و 11 مورد موراکسلا کاتارالیس (22%) در نمونه ها شناسایی شد. نتیجه گیری: باکتری های سخت رشد از عوامل مهم ایجاد کننده ی عفونت گوش میانی می باشند .شناسایی اینها به روش کشت بسیار دشوار است ولی روش Multiplex PCR به مراتب از روش های کشت و تست های بیوشیمیایی دقیق تر، سریع تر و حساس تر می باشد و می تواند در زمان کوتاهی پاتوژن های مهاجم را بوسیله این روش شناسایی کرد.