جلد 42، شماره 2 - ( 4-1397 )                   جلد 42 شماره 2 صفحات 71-78 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


انیستیتو پاستور
چکیده:   (410 مشاهده)
خلاصه
سابقه و هدف: با توجه به اهمیت تشخیص سریع سم ویبریو کلرا در نمونه‌هایی مانند آب و یا غذا، در این مطالعه اقدام به طراحی و راه‌اندازی یک روش ایمنواسی برای شناسایی مستقیم سیتوتوکسین B این باکتری، با استفاده از آنتی‌بادی مرغی شده است. 
مواد و روش ها: توالی ژنی ctxB در وکتور بیانی pET28a کلون شده و سپس در باکتری BL21 (DE3) بیان گردید. پروتئین‌های نوترکیب حاصله پس از تخلیص با روش ایمنوکروماتوگرافی، به‌صورت درون ماهیچه‌ای به مرغ تزریق و آنتی‌بادی پلی‌کلونال ضد پروتئین CtxB با استفاده از پلی‌اتیلن گلیکول از زرده تخم‌مرغ تخلیص شدند. این آنتی‌بادی‌ها برای طراحی یک روش الایزای ساندویچ مورد استفاده قرار گرفتند. حساسیت آنالیتیک روش طراحی‌شده با استفاده از رقت‌های سریالی پروتئین CtxB نوترکیب مورد ارزیابی قرار گرفت.
یافته ها: در ازاء هر لیتر کشت باکتری BL21 (DE3) حاوی پلاسمید دربرگیرنده ژن ctxB، 38 میلی‌گرم پروتئین نوترکیب با خلوص بیش از 95 درصد تولید گردید. تیتر آنتی‌بادی ضد CtxB در خون مرغ‌ ایمیونیزه برابر با 1 به 32.000 بود و میزان 9/50 میلی‌گرم آنتی‌بادی مرغی از هر تخم‌مرغ خالص گردید. روش الایزای طراحی‌شده با این آنتی‌بادی امکان تشخیص CtxB را تا غلظت 33 پیکوگرم بر میلی‌لیتر فراهم نمود.
نتیجه گیری و پیشنهادات:  آنتی‌بادی‌های مرغی ضد CtxB تولیدشده در این مطالعه، امکان ایجاد یک روش ایمنواسی را فراهم نمودند که با آن تشخیص سریع و با حساسیت بالای سیتوتوکسین B فراهم می‌گردد. لازم است تا در آینده کارآیی این روش جهت تشخیص سم ویبریو در نمونه‌های محیطی مانند آب و یا مواد غذایی مورد بررسی قرار گیرد.
 
متن کامل [PDF 556 kb]   (166 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشی | موضوع مقاله: ژنتیک مولکولی
دریافت: ۱۳۹۶/۱۰/۲ | پذیرش: ۱۳۹۶/۱۰/۲۳ | انتشار: ۱۳۹۷/۴/۲۳