مهدی بهدانی، مرتضی کریمی پور، حسین خان احمد، نادر اسدزاده، کیهان آزادمنش، علیرضا خبیری، مهدی حبیبی انبوهی، سیروس زینلی،
جلد ۳۵، شماره ۲ - ( ۴-۱۳۹۰ )
چکیده
چکیده
سابقه و هدف: بخشی از آنتی‌بادی‌های شتر فاقد زنجیره سبک هستند و ناحیه اتصال به آنتی‌ژن در این نوع از آنتی‌بادی‌ها تنها دارای یک دومین می‌باشد. یکی از پروتئین‌های درگیر در آنژیوژنز گیرنده ۲ فاکتور رشد سلول‌های آندوتلیال عروق (VEGFR-۲) است که در تومورهای مختلف افزایش دارد و بررسی آن در سطح سلول‌ها با آنتی‌بادی در تحقیقات انجام می‌گیرد.
روش بررسی: دو شتر نر توسط آنتی‌ژن VEGFR-۲ ایمن شدند. برای بررسی ایمن شدن شترها تست الایزا انجام گرفت. آنتی‌بادی-های شتری توسط ستون‌های کروماتوگرافی پروتئین A و G تخلیص گردیدند. از آنتی‌بادی‌های پلی‌کلونال جدا شده در تست الایزا بر پایه سلول (Cell-based ELISA) جهت بررسی میزان بیان پروتئین VEGFR-۲ در سطح سلول‌های ۲۹۳/KDR، HUVECs و A۴۳۱ مورد استفاده قرار گرفت.
یافته‌ها: در تست الایزا، سرم شترها تا رقت ۱۲۸۰۰/۱ پاسخ دادند. آنتی‌بادی‌های تک زنجیره‌ای توسط ستون‌های افینیتی کروماتوگرافی جدا شدند و در SDS-PAGE تایید شدند. در تست الایزا بر پایه سلول (Cell-based ELISA)، سلول ۲۹۳/KDR نسبت به سلول HUVECs جذب نوری بالاتری داشت و در مقابل سلول A۴۳۱ جذب نوری کمتری را نشان داد که دلیل آن عدم حضور VEGFR-۲ در سطح این سلول می‌باشد.
نتیجه‌گیری: آنتی‌بادی پلی کلونال تک زنجیره‌ای می‌تواند در طراحی کیت الایزا برای تشخیص شکل محلول این پروتئین، استفاده در فلوسیتومتری برای تشخیص سلول‌های بیان کننده این گیرنده، انجام وسترن بلاتینگ و ایمنوهیستوشیمی بر روی بافت‌ها استفاده شود.
واژگان کلیدی: شتر، آنتی‌بادی تک زنجیره‌ای، آنتی‌بادی پلی‌کلونال، گیرنده ۲ فاکتور رشد سلول‌های آندوتلیال عروق
