fa جداسازی و ایمنوفنوتایپینگ سلول‌های اپی‌تلیالی پرده آمنیون ایمنی‌شناسی Immunology پژوهشی Original <div style="text-align: justify;"><strong>سابقه و هدف: </strong>سلول‌های اپیتلیال پرده آمنیون (hAECs) جمعیت هتروژنی با توانایی تمایز به سه رده سلولی لایه ژرمینال هستند. هدف این مطالعه بهبود روش-های جداسازی و اینمونوفنوتایپینگ سلو‌ل‌های بنیادی تخلیص شده با استفاده از پنلی از آنتی‌بادی‌های ضد مارکرهای بنیادی بود.<br> <strong>روش بررسی: </strong>چهار واحد جفتی از مادرانی که تحت جراحی سزارین انتخابی بوده و هنوز نه ماه بارداری کامل نشده بود تهیه گردید و در شرایط استریل و با حفظ زنجیره سرمایی به آزمایشگاه منتقل شد. پرده آمنیون به صورت مکانیکی از لایه کوریون جدا شده و با استفاده از trypsin- EDTA هضم آنزیمی گردید و سوسپانسیون سلولی به دست آمده جمع آوری شد و پس از چند بار شستشو با استفاده از مارکر اپیتلیالی سایتوکراتین از لحاظ درصد خلوص بررسی گردید. سپس سلو‌‌ل‌های به دست آمده از نظر بیان مارکرهای CD29, CD9, CD34, CD45, CD44, CD133, CD73, CD105, CD38, CD10 MHC-I, MHC-II, HLA-G, SSEA-4, STRO و OCT-4 با استفاده از فلوسایتومتری مورد بررسی قرار گرفت.<br> <strong>یافته‌ها</strong>: تعداد 80-130 میلیون سلول، بسته به کیفیت و اندازه پرده آمنیون از هر واحد جفتی به دست آمد. بیان 90 درصدی مارکر سایتوکراتین نشان دهنده درصد خلوص بالای این سلول‌ها بود. بررسی فلوسایتومتری سلولها نشان داد این سلول‌ها از نظر بیان مارکرهای CD9, CD10, CD29, CD73, CD105, HLAI, HLA-G, OCT-4, SSEA-4 و STRO مثبت بوده که نشان دهنده بنیادی بودن این سلول‌ها می باشد. این سلو‌لها از نظر بیان مارکرهای CD34, CD38, CD44, CD45, HLA-DR و CD133 منفی بودند. <strong>نتیجه‌گیری: </strong>نتایج حاصل از ایمونوفنوتایپینگ نشان داد که سلول‌های hAECs مارکرهای زیادی را بیان می‌کنند که با سلول‌های بنیادی جنینی مشترک می باشد و به نظر می‌رسد که بتوان به عنوان منبع جدیدی از سلول‌های بنیادی در کاربردهای درمانی استفاده شود.</div> &nbsp;<strong>Background</strong>: Human amniotic epithelial cells (hAECs) have been introduced as a valuable source of stem cells with therapeutic applications. Despite the extensive study and emerging evidence, cell surface marker signature of hAECs remained controversial. The aim of the present study was to establish an efficient and optimized isolation procedure of hAECs and their characterization in terms of proliferation and stem cell markers.<br> <strong>Materials and methods:</strong> Four human placentas were collected from healthy women undergoing elective caesarian delivery at term labor under sterile condition. Amniotic membranes were carefully isolated and subjected to trypsin digestion. Single cell suspensions were obtained and the epithelial origin was confirmed by assessment of cytokeratin expression. Expression of CD9, CD10, CD29, CD34, CD38, CD44, CD45, CD73, CD105, CD133, MHC-I, HLA-DR, HLA-G, SSEA-4, STRO-1 and OCT-4 was then evaluated by flow cytometry.<br> <strong>Results</strong>: The overall yield of hAEC ranged from 80-130&times;106 cells per placenta with more than 98% viability. Microscopic examination revealed that hAECs are large and refractive cells with great capacity to adhere to plastic surfaces. The cells substantially expressed cytokeratin implying their epithelial origin. Flow cytometry data revealed that hAECs are a heterogenic population consisting of immune phenotypically mixed cells. Nearly all purified cells expressed mesenchymal markers, CD9, CD10, CD29, and CD73. A large proportion of cells also expressed HLA-I, HLA-G, STRO-1, OCT-4 and SSEA-4. Isolated cells, however, failed to express CD34, CD38, CD44, CD45, CD105, CD133 and HLA-DR.<br> <strong>Conclusion</strong>: The procedure presented here is a simple and cost-effective protocol for isolation of a large numbers of viable hAECs. Surface markers and such features as proliferation capacity of hAECs are among the characteristics that are strongly dependent upon isolation and cell culture conditions. Thus such variables should be taken in to consideration when stem cell properties of hAECs are to be interpreted.&nbsp; جفت, سلول بنیادی, پرده آمنیون, سلول اپیتلیال. Placenta, Stem cell, Amniotic membrane, Epithelial cells, Immunophenotype. 1 7 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-652&slc_lang=fa&sid=1 Meraj Tabatabaei معراج طباطبایی 100319475328460030426 100319475328460030426 No Department of Immunology, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical , TeScienceshran, Iran گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی Amir Hossein Zarnani امیر حسن زرنانی 100319475328460030427 100319475328460030427 No 2 Department of Immunology, Faculty of Medicine, Tarbiat Modarres University, Tehran, Iran 3 Fertility Research Center, Ebn Sina Institute, Tehran, Iran گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس تهرانمرکز تحقیقات باروری، پژوهشگاه ابن سینا Shohreh Nikoo شهره نیکو 100319475328460030428 100319475328460030428 No Nano Biotechnology Center, Ebn Sina Institute, Tehran, Iran مرکز نانو بیوتکنولوژی، پژوهشگاه ابن سینا Bahareh Keshavarzi بهاره کشاورزی 100319475328460030429 100319475328460030429 No Department of Immunology, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical , TeScienceshran, Iran گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی Fahimeh Ramzani Tehrani فهیمه رمضانی تهرانی 100319475328460030430 100319475328460030430 No Immunology Research Center, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات ایمونولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تهران Soheila Arefi سهیلا عارفی 100319475328460030431 100319475328460030431 No Reproductive Endocrinology Research Center, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran مرکز تحقیقات اندوکرینولوژی تولیدمثل، دانشگاه علوم پزشکی شهیدبهشتی Ebrahim Mirzadegan ابراهیم میرزادگان 100319475328460030432 100319475328460030432 No Department of Immunology, Faculty of Medicine, Tarbiat Modarres University, Tehran, Iran گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس تهران Nariman Mosaffa نریمان مصفا narimmanmosaffa@gmail.com 100319475328460030433 100319475328460030433 Yes Department of Immunology, Faculty of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه ایمونولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی