Pejouhesh dar Pezeshki (Research in Medicine)

fa اثر بستر سه‌ بعدی حاصل از بافت سلول‌زدایی‌شده بیضه رت بر روی تمایز سلول‌های اسپرماتوگونی موش Effect of 3D substrate obtained from decellularized tissue of rat testis on the differentiation of mouse spermatogonial cells علوم تشریحی (آناتومی، بافت شناسی، جنین شناسی، بیولوژی تولید مثل) Anatomical sciences (anatomy, histology, embryology, reproductive biology) پژوهشی Original <div style="text-align: justify;">سابقه و هدف: در جنس مذکر، سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی (Spermatogonial stem cells-SSCs) عامل تولید سلول‌های جنسی و باروری هستند و کاهش و آسیب به آن‌ها از عوامل ناباروری است. کشت، تکثیر و تمایز SSCs در محیط آزمایشگاهی می‌تواند راهکاری برای درمان برخی از موارد ناباروی باشد. ما در این مطالعه که در سال 1399 در مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران انجام دادیم، رشد و تمایز SSCs روی بافت بیضه سلول‌زدایی شده (Decellularized testicular matrix-DTM)  موش صحرایی را بررسی کردیم. روش کار: در این مطالعه تجربی، پس از استخراج SSCs با روش آنزیمی ‌از بافت بیضه موش تازه متولدشده این سلول‌ها به مدت سه هفته در محیط کشت اختصاصی تکثیر شدند. سلول‌ها پس از تأیید هویت، برای تمایز در دو گروه یکی بر روی یک لایه ازDTM  و دیگری در ظروف کشت معمول کشت داده شدند. پس از گذشت چهار هفته کشت تمایزی بیان ژن‌‌های پیش از میوز (شامل: PLZF و OCT4) و ژن‌‌های میوزی (شامل: SCP3 و Protamine-2) در هر دو گروه با روش Real-time PCR سنجیده شد. برای اطمینان از نتایج حاصل تمام مراحل کار با سه بار تکرار زیستی انجام شد و نتایج حاصل با روش آنالیز واریانس یک طرفه (One way ANOVA) ارزیابی شد. یافته‌ها: بررسی میزان بیان ژن‌‌ها‌ی پیش‌میوزی و میوزی پس از چهار هفته کشت تمایزی SSCs روی بستر دو بعدی و DTM با استفاده از Real-time PCR نشان داد که میزان بیان ژن‌‌های میوزی روی بستر DTM به میزان معنا‌داری افزایش یافته است (P ≤ 0.01). نتیجه‌گیری: در شرایط کشت سه بعدی حاصل از DTM به دلیل ارتباط بهتر سلول‌ها و وجود ماتریکس خارج سلولی طبیعی، شرایط مناسب‌تری برای حفظ، تکثیر و تمایز SSCs‌ نسبت به کشت دو بعدی ایجاد شده است.  </div> Background and Aim: In males, spermatogonial stem cells (SSCs) are the cause of germ cell production and therefore fertility. Reducing and damaging SSCs is one of the causes of infertility. Culture, proliferation, and differentiation of SSCs in vitro can be a solution to treat some cases of infertility. In the present study, performed in 2019 at the Iranian Biological Resource Center, we examined the growth and differentiation of SSCs on decellularized testicular matrix (DTM) in rats. Methods: In the current experimental study, after extraction of SSCs by enzymatic method from testicular tissue of newborn mice, these cells were propagated in a specific culture medium for three weeks. After confirming the identity of the colonies resulting from the growth of these cells, they were cultured in two groups, one on a layer of DTM and the other in two-dimensional conditions of conventional culture dishes with differential culture medium. In the fourth week, since the initiation of the differentiation culture, the expression of pre meiotic (OCT4 & PLZF) and meiotic (SCP3 & Protamine-2) genes were measured in both groups. To ensure the results, all steps were performed with three biological replications and the results were evaluated using one way ANOVA. Results: : Examination of pre-meiotic and meiotic gene expression after 4 weeks of differential culture of SSCs on two-dimensional substrate and DTM using real-time PCR showed that the expression of meiotic genes was significantly higher on DTM substrate (P ≤ 0.01). ). Conclusion: In DTM three-dimensional culture, due to the better communication of cells with each other and the presence of a natural extracellular matrix, more ideal conditions are created for the preservation, proliferation and differentiation of SSCs‌ than in two-dimensional culture. سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی؛ ماتریکس خارج سلولی؛ سلول‌زدایی؛ تمایز. Spermatogonial Stem Cells, Decellularization, Extracellular matrix, Differentiation. 19 29 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4380-1&slc_lang=fa&sid=1 Sanaz Ashouri Movassagh ساناز آشوری موثق 100319475328460026814 100319475328460026814 No Reproductive Biotechnology Research Center, Avicenna Research Institute, ACECR, Tehran, Iran جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی تولید مثل، مؤسسه تحقیقات ابن‌سینا، تهران، ایران Sepideh Ashouri Movassagh سپیده آشوری موثق ashouri_sepideh@yahoo.com 100319475328460026813 100319475328460026813 Yes Human and Animal Cell Bank, Iranian Biological Resource Center, ACECR, Tehran, Iran. ; Department of Anatomy, School of Medicine, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. جهاد ‌دانشگاهی، مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران، بانک سلول‌های انسانی و جانوری، تهران، ایران. ; گروه آناتومی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران.