fa بررسی تأثیر سایز حفرات داربست‌های کیتوزان- ژلاتین در اتصال سلول‌های اپیتلیال پردۀ آمنیون به منظور کاربرد در مهندسی بافت ایمنی‌شناسی Immunology پژوهشی Original چکیده سابقه و هدف: امروزه پردۀ آمنیون، به عنوان یک منبع با ارزش سلولی، کاربردهای فراوانی به ویژه در حیطۀ طب ترمیمی دارد. از سوی دیگر ایجاد بسترهای سه بعدی با ویژگی‌های مطلوب برای کشت سلول، که بسته به نوع سلول نیز می‌باشد، اهمیت زیادی پیدا کرده است. لذا این تحقیق با هدف طراحی بسترهای مناسب برای به کارگیری سلول‌های اپیتلیال پردۀ آمنیون در تحقیقات مهندسی بافت انجام شد. روش بررسی: این مطالعه به صورت تجربی انجام پذیرفت. ابتدا داربست‌های سه بعدی کیتوزان و کیتوزان-ژلاتین با روش Freeze-Dry در دماهای متفاوت (20-، 80-، 196-) از مرحله پیش انجماد آماده‌سازی و سایز حفرات با میکروسکوپ الکترونی ارزیابی شد. همچنین با استفاده از فرمول مناسب، تخلخل (Porosity) داربست‌ها اندازه‌گیری شد. در مرحلۀ بعد، سلول‌های اپیتلیالی جدا شده از پردۀ آمنیون روی داربست‌های با سایز حفرات متفاوت کشت داده شدند. از تصاویر SEM و تست MTT نیز برای تایید اتصال سلول‌های مورد نظر به داربست استفاده گردید. یافته‌ها: طراحی مورد هدف با موفقیت انجام پذیرفت که حاصل انجام تکرارپذیری این مطالعه بود. نتایج میکروسکوپ الکترونی حاکی از سایز حفرات بزرگتر در دمای بالاتر و در مدت زمان طولانی‌تر از مرحلۀ پیش انجماد بود (20-). تخلخل 73 درصد داربست-ها برای کشت سلول مطلوب بود. از سوی دیگر نتایج MTT سلول‌ها روی داربست، اهمیت سایز حفرات (~ 100 میکرون) را در اتصال سلول به بستر تایید کرد. نتیجه‌گیری: به نظر می‌رسد که داربست های کیتوزان- ژلاتین و کیتوزان با سایز حفرات بزرگ‌تر، باعث افزایش شانس اتصال سلول-های اپیتلیال پردۀ آمنیون به بستر شده و از این رو می‌توانند به عنوان یک بستر ساخته شده از مواد طبیعی برای اهداف مهندسی بافت استفاده شوند. واژگان کلیدی: داربست، کیتوزان، سلول‌های اپیتلیال پردۀ آمنیون. Abstract Background: The amniotic membrane has gained much attention in regenerative medicine as a precious cell source. Recently, reparation of three dimensional matrices (scaffold) with appropriate specificity for cell culture, which depends on cell type, has been the subject of many studies .This study aimed to design optimal three-dimensional matrices in order to utilize amniotic epithelial cells for tissue engineering studies. Materials and methods: In this experimental study, chitosan and chitosan-gelatin scaffolds were formed by freeze-drying technique at different pre-freezing temperatures (-20/-80/-196°C). Sample pore size was analyzed by scanning electron microscope (SEM) and porosity was measured by liquid displacement method. Amniotic epithelial cells isolated from amniotic membrane, were cultured on scaffolds with different pore sizes and the attachment of these cells was evaluated using MTT-Formazan assay and SEM images. Results: Electron microscope results showed larger pore size at higher temperature (-20) and longer pre-freezing time. The porosity of 73% was desirable for cell culture. Furthermore, MTT findings confirmed the importance of pore size (100 µm) in cell adhesion to the scaffold. Conclusion: It seems that chitosan and chitosan-gelatin scaffolds with larger pore size increase the chance of amniotic epithelial cells attachment. Thus, these natural scaffolds can be used as suitable matrices for tissue engineering purposes. Keywords: Scaffold, Chitosan, Amniotic Epithelial cells. واژگان کلیدی: داربست، کیتوزان، سلول‌های اپیتلیال پردۀ آمنیون. Keywords: Scaffold, Chitosan, Amniotic Epithelial cells. 4 10 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-589&slc_lang=fa&sid=1 Fatemeh Khatami فاطمه خاتمی 10031947532846006152 10031947532846006152 No Department of Immunology, School of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه ایمونولوژی، دانشکدۀ پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی Hassan Niknejad حسن نیک نژاد 10031947532846006153 10031947532846006153 No Nanomedicine & Tissue Engineering Research Center, Taleghani Hospital, Shahid Beheshti University of Medical مرکز تحقیقات نانوتکنولوژی و مهندسی بافت، بیمارستان طالقانی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی , Nariman Mosaffa نریمان مصفا mossafan@sbmu.ac.ir 10031947532846006154 10031947532846006154 Yes Department of Immunology, School of Medicine, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran گروه ایمونولوژی، دانشکدۀ پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی Habiballah Peirovi حبیب الله پیروی 10031947532846006155 10031947532846006155 No Nanomedicine & Tissue Engineering Research Center, Taleghani Hospital, Shahid Beheshti University of Medical مرکز تحقیقات نانوتکنولوژی و مهندسی بافت، بیمارستان طالقانی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی