fa ساخت آنتی بادی فلورسنت علیه ویروس هاری و بررسی کارایی آن بین رشته ای ( مدیریت آموزشی، تحقیقات آموزشی، آموزش پزشکی ) Interdisciplinary (Educational Management, Educational research, Statistics, Medical education پژوهشی Original چکیده سابقه و هدف: با توجه به مطرح بودن بیماری هاری و اهمیت آنتی‌بادی ضد ویروس هاری کونژوگه شده با ماده فلورسنت و اینکه آنتی‌بادی فعلی کشور وارداتی و دارای قیمت نسبتاً بالایی می‌باشد و برای پاسخ به این سوال که آیا امکان ساخت آنتی بادی فلورسنت ضد ویروس هاری وجود دارد یا خیر، و در صورتی که پاسخ مثبت باشد آیا کارایی لازم را دارد، تحقیق حاضر انجام گرفت. روش بررسی: تحقیق در مرحله اول به روش اکتشافی و در مرحله بعد به روش تجربی انجام گرفت. بعد از خونگیری و جدا سازی سرم خرگوش های ایمن شده با واکسن هاری، سرم بدست آمده توسط آمونیوم سولفات رسوب داده شده و تحت فیلتراسیون به کمک ژل قرار گرفت. در قدم بعدی برای تخلیص IgG، کروماتوگرافی تعویض یونی انجام گرفت. در مرحله بعد برای تایید وجود آنتی بادی و اختصاصیت آن از تکنیک Dot blotting استفاده شد. بعد از تایید در این مرحله، آنتی بادی تخلیص شده با فلورسئین ایزو تیوسیانات(FITC) کونژوگه شده و در تست ایمونو فلورسنت اختصاصیت، درخشندگی و شفافیت کافی، به عنوان قابل قبول تلقی شد. یافته‌ها: بیشترین میزان IgG در بافر با غلظت mM100 نمک NaCl (Flow Through) از ستون کروماتوگرافی تعویض یونی خارج شد. نمونه 100 میلی مولار حاوی IgG بهتر و بیشتر با فلورسئین ایزو تیوسیانات پیوند کووالان برقرار کرده وکونژوگه شد. نتیجه‌گیری: نتایج نشان می‌دهد که این آنتی بادی قادر به نشان دادن علائم حضور ویروس در نمونه مغز حیوان هار است. به نظر می‌رسد که می توان تهیه آنتی بادی فلورسنت ضد ویروس هاری را در پژوهش های بعدی بهینه و در صورت تایید برای تولید انبوه اقدام کرد. واژگان کلیدی: فلورسئین ایزوتیوسیانات، تست ایمونوفلورسنت، فیلتراسیون به کمک ژل، Dot blotting، کروماتوگرافی تعویض یونی. Abstract Background: Rabies is the most important zoonosis in country. Anti-viral antibody conjugated with Fluorescein Isothiocyanate (FITC), is used for diagnosis of Rabies. We import this reagent from abroad. In this study we aimed to prepare this conjugated fluorescein antibody and assess its utility. Materials and methods: Rabbits were immunized with rabies vaccine, then serum samples were taken and concentrated by ammonium sulfate and treated by gel-filtration. To purify IgG concentrated serum protein ion exchange chromatography was done. Validation method such as Dot-blot technique was applied for confirmation of the extracted IgG and for its specificity. Anti rabies antibody was conjugated with FITC and evaluated against commercial conjugate. Potency of locally made antibody was considered acceptable if this antibody had enough specificity and brightness in comparison to commercial antibody. Results: Maximum quantity of IgG was extracted at 100 mM NaCl in ion exchange chromatography. Comparison of two fractions showed better efficacy of conjugation with 100 mM NaCl comparing with 200mM NaCl fraction. Conclusion: The study showed the feasibility of preparation of the fluorescent antibody with comparable efficacy to the commercial antibody. Keywords: Fluorescein Isothiocyanate, Immunofluorescent test, Gel filtration, Dot blotting, Ion Exchange Chromatography. واژگان کلیدی: فلورسئین ایزوتیوسیانات، تست ایمونوفلورسنت، فیلتراسیون به کمک ژل، Dot blotting، کروماتوگرافی تعویض یونی. Keywords: Fluorescein Isothiocyanate, Immunofluorescent test, Gel filtration, Dot blotting, Ion Exchange Chromatography. 167 172 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-620&slc_lang=fa&sid=1 Vahidi Gholami Arjenak وحید غلامی ارجنکی 10031947532846006463 10031947532846006463 No Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات تهران Seyed Hamid Reza Miandeh Mozhgani سید حمید رضا مژگانی 10031947532846006464 10031947532846006464 No Viral vaccines production department, Pasteur Institute of Iran. Karaj- Km 25.Iran بخش تولید واکسن های ویروسی، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Narges Miandeh, نرگس میاندهی 10031947532846006465 10031947532846006465 No Viral vaccines production department, Pasteur Institute of Iran. Karaj- Km 25.Iran بخش تولید واکسن های ویروسی، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Ali Reza Janani علیرضا جنانی 10031947532846006466 10031947532846006466 No Viral vaccines production department, Pasteur Institute of Iran. Karaj- Km 25.Iran بخش تولید واکسن های ویروسی، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Mehdi Ajorloo مهدی آجورلو 10031947532846006467 10031947532846006467 No Viral vaccines production department, Pasteur Institute of Iran. Karaj- Km 25.Iran بخش تولید واکسن های ویروسی، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Ali reza Zavareh علیرضا زوارهء 10031947532846006468 10031947532846006468 No WHO CC For Reference and Research on Rabies, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش تحقیقات و مرکز رفرانس هاری، انستیتو پاستور ایران Seyed Mohamad Atyabi سید محمد اطیابی 10031947532846006469 10031947532846006469 No Pilot Biotechnology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش پایلوت بیوتکنولوژی، انستیتو پاستور ایران Nabiallah Namvar Asl نبی الله نامور اصل 10031947532846006470 10031947532846006470 No Animal science and research department, Pasteur institute of Iran. Karaj- Km 25 بخش علوم حیوانات آزمایشگاهی، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Saeed Jodairi Eslami سعید جدیری اسلامی 10031947532846006471 10031947532846006471 No Viral vaccines production department, Pasteur Institute of Iran. Karaj- Km 25.Iran بخش تولید واکسن های ویروسی، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Alireza Gholami علیرضا غلامی agholami@pasteur.ac.ir| 10031947532846006472 10031947532846006472 Yes Molecular and Cellular Biology Department, Royan Institute, Isfahan, Iran بخش تولید واکسن های ویروسی، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران