fa بهبود تمایز قلبی سلول‌‌های بنیادی بافت چربی انسانی با استفاده از ترکیب bFGF و BMP4 پژوهشی Original <strong>سابقه و هدف:</strong> سلول‌‌های بنیادی بافت چربی منبع سلولی امیدبخشی برای کاربرد در مهندسی بافت قلب و ترمیم قلب آسیب دیده هستند. با این حال، پیش از استفاده درمانی از این سلول‌ها شناخت بهتر فاکتورهای موثر بر تمایز آنها به کاردیومیوسیت لازم است. تحقیق حاضر به منظور مطالعه تاثیر <span dir="LTR">bFGF</span> و <span dir="LTR">BMP4</span> بر تمایز قلبی سلول‌های بنیادی بافت چربی انسانی طراحی شد.<br> <strong>مواد و روش ها:</strong> در این مطالعه تجربی، سلول‌های بنیادی از بافت چربی زیر جلدی ناحیه شکمی انسان جداسازی و کشت داده شد. به منظور تمایز کاردیومیوسیتی، سلول‌ها به مدت چهار روز در محیط دارای 10 درصد <span dir="LTR">FBS</span> یا 5/0 درصد <span dir="LTR">B27</span> قرار گرفتند و با غلظت 10 نانوگرم بر ‌‌‌میلی‌لیتر <span dir="LTR">bFGF</span> و یکی از غلظت‌‌های 20، 50 یا 100 نانوگرم بر ‌‌‌میلی‌لیتر <span dir="LTR">BMP4</span> تیمار شدند. سپس تمایز سلول‌ها تا انتهای هفته سوم در محیط دارای 10 درصد <span dir="LTR">FBS</span> ادامه یافت. در انتهای تمایز، بیان ژن‌ها و پروتئین‌های قلبی با روش‌‌های <span dir="LTR">RT-PCR</span>، <span dir="LTR">qPCR</span> و ایمونوسیتوشیمی بررسی شد.<br> <strong>یافته‌ها:</strong> سلول‌‌های بنیادی تمایز یافته ژن‌‌های اختصاصی قلب را بیان کردند. طبق نتایج <span dir="LTR">qPCR</span>، سلول هایی که در محیط دارای <span dir="LTR">FBS</span> با <span dir="LTR">bFGF </span>&nbsp;و 20 نانوگرم بر ‌‌‌میلی‌لیتر <span dir="LTR">BMP4</span> القا شدند، بیشترین بیان ژن‌‌های <span dir="LTR">ANF</span> و <span dir="LTR">MLC2A</span> را نشان دادند. از طرفی، تیمار سلول‌ها با فاکتورهای تمایزی <span dir="LTR">BMP-4</span> و <span dir="LTR">bFGF</span> در محیط دارای <span dir="LTR">FBS</span> نسبت به محیط دارای <span dir="LTR">B27</span> تمایز کاردیومیوسیت‌ها را بهتر القا کرد. سلول هایی که در محیط دارای <span dir="LTR">FBS</span> با <span dir="LTR">bFGF </span>&nbsp;و 20 نانوگرم بر ‌‌‌میلی‌لیتر <span dir="LTR">BMP4</span> القا شدند، پروتئین‌‌های قلبی تروپونین <span dir="LTR">I</span> و آلفا-اکتینین را بیان کردند.<br> <strong>نتیجه‌گیری:</strong> به نظر می رسد که ترکیب <span dir="LTR">bFGF</span> و <span dir="LTR">BMP4</span> تمایز سلول‌های بنیادی بافت چربی به کاردیومیوسیت را بهبود می‌بخشد. از طرفی، تیمار با با این فاکتورهای تمایزی در محیط دارای <span dir="LTR">FBS</span> نسبت به محیط دارای <span dir="LTR">B27</span> تمایز کاردیومیوسیتی بهتری را به دنبال داشت که یکی از دلایل احتمالی آن وجود انسولین در <span dir="LTR">B27</span> است. <strong>Background and Aim:</strong> Adipose-derived stem cells (ADSCs) represent a promising <em>source</em> of <em>cells for cardiac tissue </em>engineering and repair of the injured heart. However, better understanding of the factors affecting the cardiac differentiation of ADSCs is required before clinical application of these cells. Current study was designed to investigate the role of bFGF and BMP4 in cardiac differentiation of human ADSCs.<br> <strong>Materials and Methods:</strong> ADSCs were isolated from human abdominal subcutaneous adipose tissue and cultured. For cardiac differentiation, ADSCs were treated with 10 ng/ml bFGF and 20, 50 or 100 ng/ml BMP4 in a medium containing 10% FBS or 0.5% B27 for four days. Then the induction factors were completely omitted, and the cells were maintained in 10% FBS-containing medium for up to three weeks. At the end of differentiation period, the expression of some cardiac markers was assessed by RT-PCR, qPCR and immunocytochemistry.<br> <strong>Results: </strong>The differentiated ADSCs expressed cardiac-specific genes. Based on qPCR analysis, the maximum expression level of <em>ANF</em> and <em>MLC2A</em> mRNAs was detected in the cells treated with 10 ng/ml bFGF and 20 ng/ml BMP4 in the FBS-containing medium. Moreover, FBS supplementation of induction medium was more effective than the B27-containing medium for cardiac differentiation of ADSCs by bFGF and BMP4. The cells treated with 10 ng/ml bFGF and 20 ng/ml BMP4 in FBS-containing medium expressed cardiac troponin I and &alpha;-actinin proteins.<br> <strong>Conclusion:</strong> It seems that a combination of bFGF and BMP4 improves cardiac differentiation of ADSCs. Moreover, bFGF and BMP4 are more effective for cardiac differentiation when the induction medium is supplemented with FBS than B27. This may be due to the presence of insulin in B27 supplement.&nbsp;&nbsp; سلول‌‌های بنیادی بافت چربی, تمایز, کاردیومیوسیت, bFGF, BMP4 ADSCs, differentiation, cardiomyocyte, bFGF, BMP4. 21 27 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3214-1&slc_lang=fa&sid=1 sanaz Hasani Lialestani ساناز حسنی لیالستانی sanazhasani96@yahoo.com 100319475328460029063 100319475328460029063 No 1- National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology. 2- University of Mohaghegh Ardabili 1- پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست‌فناوری. 2-دانشگاه محقق اردبیلی Arash Javeri آرش جاوری arashj@nigeb.ac.ir 100319475328460029064 100319475328460029064 No National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology ژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست‌فناوری Asadollah Asadi اسداله اسدی asadyasad@yahoo.com 100319475328460029065 100319475328460029065 No University of Mohaghegh Ardabili دانشگاه محقق اردبیلی Masoumeh Fakhr Taha معصومه فحرطه mftaha@nigeb.ac.ir 100319475328460029066 100319475328460029066 Yes National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست‌فناوری