fa جداسازی و تعیین خصوصیات اگزوزوم های جدا شده از سلول های بنیادی مزانشیم با استفاده از روش اولترا سانتریفیوژ كاربردي Applicable <h1 dir="RTL"><strong>چکیده</strong></h1> <strong>سابقه و هدف</strong>: در سال‌های اخیر عملکردهای سلول‌های بنیادی مزانشیم در مرکز توجه قرار گرفته است. شواهد نشان می‌دهد سلول‌های بنیادی مزانشیم به شیوه‌ای پاراکرین عمل می‌کنند؛ بنابراین، عوامل بیولوژیکی از جمله اگزوزوم ها و عوامل محلول در آب، در محیط کشت سلول‌ها وجود دارند که می‌توانند عملکردی مشابه سلول‌های بنیادی مزانشیم داشته باشند. <u>بنابراین جداسازی اگزوزوم ها از سلول‌های بنیادی مزانشیم و تعیین خصوصیت آن‌ها و تأییدشان می‌تواند جهت پیشبرد اهداف درمانی در بیماری‌هایی همانند بیماری‌های خود ایمن و سرطان&nbsp; مورد استفاده قرار گیرد.</u> <u>استفاده از اگزوزوم های جداشده از سوپ و مایع رویی کشت سلول‌های بنیادی مزانشیمی&nbsp; خطرات و مشکلات سلول درمانی را ندارد و همچنین کارایی بیشتری نسبت به مایع رویی کشت سلول دارد.</u><br> <strong>مواد و روش‌ها</strong>:در این <u>مطالعه &nbsp;تجربی </u>از بافت چربی، سلول‌های بنیادی مزانشیم استخراج شده است و پس از تعیین هویت سلول‌های بنیادی مزانشیم، از سوپ سلولی سلول‌های بنیادی مزانشیم با استفاده از روش سانتریفیوژ تفریقی اگزوزوم ها جداسازی گردید. غلظت اگزوزوم ها با روش بردفورد تعیین و همچنین <u>خصوصیات کیفی </u>آن‌ها توسط میکروسکوپ الکترونی و دستگاه تفریقی نور تعیین شد.<br> <strong>یافته‌ها</strong>:بعد از کشت و پاساژ سلول‌های بنیادی مزانشیم،سوپ سلولی بعد از 48 ساعت جمع‌آوری شده و با استفاده از سانتریفیوژ <u>تفریقی با دور </u><u><span dir="LTR">g</span></u><u>60000 &nbsp;اگزوزوم های</u> آن با اندازه‌ی تقریباً 40 تا 100 نانو متر جدا گردید. میانگین غلظت آن <span dir="LTR">&nbsp;mg/ml </span>&nbsp;630 بوده و در تصاویر میکروسکوپ الکترونی تمامیت غشا اگزوزوم هاطی فرایند جداسازی حفظ شده است و ساختار کروی دچار آسیب نشده است. نتایج آنالیز دستگاه تفریقی نور نشان می‌دهد که تقریباً 70 درصد ذرات دارای میانگین قطر 90-50 نانو متر و هستند.<br> <strong>نتیجه‌گیری</strong>: <u>در مقایسه دو روش جداسازی&nbsp; </u><u><span dir="LTR">g</span></u><u> 100000 و </u><u><span dir="LTR">g</span></u><u>60000 در نتایج به دست آمده در پژوهش‌های دیگر ذرات اگزوزوم&nbsp; در دور</u><u><span dir="LTR">g</span></u><u> 10000خالص تر می‌باشند ولی در دور</u><u><span dir="LTR">g</span></u><u> 60000 ممکن است ذرات بزرگ‌تری از اگزوزوم مانند میکرووزیکول ها دیده شوند ولی در نهایت به علت دسترسی کمتر به اولترا سانتریفیوژ با دور </u><u><span dir="LTR">g</span></u><u>100000 ، جداسازی با دور پایین‌تر هم کاربردی می‌باشد</u>.همچنین جداسازی اگزوزوم های مشتق از سلول‌های بنیادی مزانشیم &nbsp;و تولید انبوه آن <u>احتمالاً </u>می‌تواند به عنوان یک محصول زیست ایمن در درمان بیماری‌ها مورد توجه قرار گیرد.<br> &nbsp; <strong>Abstract</strong><br> <strong>Background and Aim</strong>: In recent years, Mesenchymal stem cell functions have been at the center of attention of researchers. Evidence shows that Mesenchymal stem cells act as paracrine manner and thus, biological agents such as exosomes and soluble factors are present in the supernatant that can act as same as Mesenchymal stem cells<span dir="RTL">.</span> Therefore, isolating exosomes from mesenchymal stem cells and determining their properties and their validation can be used to achieve therapeutic goals in autoimmune diseases and cancers. The use of exosomes isolated from soup and supernatant mesenchymal stem cell culture does not have any of the risks and problems of cell therapy, and also it is more effective than cell culture<br> <strong>Materials and Methods</strong>: In this study, adipose-derived Mesenchymal stem cells were used, after the identification of Mesenchymal stem cells, Mesenchymal stem cells were separated from supernatant using the ultra-centrifugation method. Concentration is determined by Bradford method and also their qualitative properties were determined using an electron microscope and Dynamic Light Scattering<span dir="RTL">.</span><br> <strong>Results</strong>: after culturing and passaging Mesenchymal stem cells, supernatant were collected after 48 hours and its exosomes were separated with a diameter of 40 to 100 nm using an ultra-centrifuge with an approximate acceleration of 60000g. Its Average concentration was 630 mg / ml, and the electron microscope images show that the membrane was not damaged during the separation process and spherical structure was maintained. Analyzed results from the Light differential device shows that almost 70% of the particles have an average diameter of 50-90 nm<span dir="RTL">.</span><br> <strong>Conclusion</strong>: Conclusion: Comparing the two methods of isolating with acceleration of 100,000g and 60000g from the results obtained in other experiments, exosome particles are more pure using acceleration of 10000 g, but using the acceleration 60,000 g, larger particles of exosomes such as Microvesicle may be seen, but ultimately due to difficulty of accessing of a centrifuges with an approximate range of 100,000 gm, separation with the lower accelerations are also applicable. Also, the isolation of mesenchymal derived stem cell exosomes and its mass production may be considered as a bio-safe product in the treatment of diseases<span dir="RTL">.</span> اگزوزوم, سلول‌های بنیادی مزانشیم,جداسازی,اولتراسانتریفیوژ Exosomes, mesenchymal stem cells, separation, ultracentrifugation 244 250 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3216-1&slc_lang=fa&sid=1 Shahrzad Nojehdehi شهرزاد نوجه دهی sh.nojehdehi@gmail.com 100319475328460016744 100319475328460016744 No دانشگاه آزاد اسلامی تهران مرکز Seyed Mahmoud Hashemi سید محمود هاشمی smmhashemi@sbmu.ac.ir 100319475328460016745 100319475328460016745 Yes دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی Ardeshir HesamPour اردشیر حسام پور a.hesampour@gmail.com 100319475328460016746 100319475328460016746 No دانشگاه آزاد اسلامی تهران مرکز