fa تولید آنتی‌بادی مرغی ضد زیر واحد B توکسین ویبریو کلرا و راه‌اندازی روش الایزا جهت تشخیص سم‌ ویبریو کلرا پژوهشی Original <div id="__zsc_once"><strong>خلاصه</strong><br> <strong>سابقه و هدف: </strong>با توجه به اهمیت تشخیص سریع سم ویبریو کلرا در نمونه‌هایی مانند آب و یا غذا، در این مطالعه اقدام به طراحی و راه‌اندازی یک روش ایمنواسی برای شناسایی مستقیم سیتوتوکسین <span dir="LTR">B</span> این باکتری، با استفاده از آنتی‌بادی مرغی شده است.&nbsp;<br> <strong>مواد و روش ها: </strong>توالی ژنی <em><span dir="LTR">ctxB</span></em> در وکتور بیانی <span dir="LTR">pET28a</span> کلون شده و سپس در باکتری <span dir="LTR">BL21 (DE3)</span> بیان گردید. پروتئین‌های نوترکیب حاصله پس از تخلیص با روش ایمنوکروماتوگرافی، به‌صورت درون ماهیچه‌ای به مرغ تزریق و آنتی‌بادی پلی‌کلونال ضد پروتئین <span dir="LTR">CtxB</span> با استفاده از پلی‌اتیلن گلیکول از زرده تخم‌مرغ تخلیص شدند. این آنتی‌بادی‌ها برای طراحی یک روش الایزای ساندویچ مورد استفاده قرار گرفتند. حساسیت آنالیتیک روش طراحی‌شده با استفاده از رقت‌های سریالی پروتئین <span dir="LTR">CtxB</span> نوترکیب مورد ارزیابی قرار گرفت.<br> <strong>یافته ها: </strong>در ازاء هر لیتر کشت باکتری <span dir="LTR">BL21 (DE3)</span> حاوی پلاسمید دربرگیرنده ژن <em><span dir="LTR">ctxB</span></em><strong>، </strong>38 میلی‌گرم پروتئین نوترکیب با خلوص بیش از 95 درصد تولید گردید. تیتر آنتی‌بادی ضد <span dir="LTR">CtxB</span> در خون مرغ‌ ایمیونیزه برابر با 1 به 32.000 بود و میزان 9/50 میلی‌گرم آنتی‌بادی مرغی از هر تخم‌مرغ خالص گردید. روش الایزای طراحی‌شده با این آنتی‌بادی امکان تشخیص <span dir="LTR">CtxB</span> را تا غلظت 33 پیکوگرم بر میلی‌لیتر فراهم نمود.<br> <strong>نتیجه گیری و پیشنهادات: &nbsp;</strong>آنتی‌بادی‌های مرغی ضد <span dir="LTR">CtxB</span> تولیدشده در این مطالعه، امکان ایجاد یک روش ایمنواسی را فراهم نمودند که با آن تشخیص سریع و با حساسیت بالای سیتوتوکسین <span dir="LTR">B</span> فراهم می‌گردد. لازم است تا در آینده کارآیی این روش جهت تشخیص سم ویبریو در نمونه‌های محیطی مانند آب و یا مواد غذایی مورد بررسی قرار گیرد.<br> &nbsp;</div> <div id="__if72ru4sdfsdfruh7fewui_once" style="display:none;"></div> <div id="__zsc_once"><strong>Background:</strong> Regarding the importance of rapid detection of cholera toxin in environmental samples, an immunoassay method was developed for direct detection of cytotoxin B.<br> <strong>Materials and Methods:</strong><br> The gene sequence of <em>ctxB</em> was cloned to pET28a vector and the recombinant protein was expressed in BL21 (DE3). The recombinant CtxB was purified by affinity chromatography and then used for immunization of chickens. The polyclonal anti-CtxB antibodies were purified from egg yolks by polyethylene glycol. The IgY antibodies were used to develop a sandwich ELISA. Analytical sensitivity of the assay was determined.<br> <strong>Results:</strong><br> 38 mg of recombinant CtxB, more than 95% purity, was purified from 1 liter of bacterial culture. The titer of anti-CtxB antibodies in the serum sample of immunized chicken was 1:32,000. The yield of purified IgY was 50.9 mg per egg yolk. The detection limit of the developed ELISA is about 33 pg/ml of recombinant CtxB.<br> <strong>Conclusion:</strong><br> Management and control of <em>Vibrio cholerae</em> infection requires the availability of rapid diagnostic tools. The newly developed immunoassay provides a rapid and sensitive method for detection of cytotoxin B of <em>V. cholerae</em>. We plan to evaluate the performance of the developed assay in detection of cholera toxin in environmental and food samples.<br> &nbsp;</div> <div id="__if72ru4sdfsdfruh7fewui_once" style="display:none;"></div> ویبریو کلرا, سیتوتوکسین B, ایمنوگلوبولین Y, ایمنواسی Vibrio Cholerae, cholera toxin b subunit, Immunoglobulin Y, immunoassay 71 78 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3273-1&slc_lang=fa&sid=1 Alireza Khabiri علیرضا خبیری akhabiri597@yahoo.com 100319475328460029100 100319475328460029100 Yes Pasteur Institute of Iran انیستیتو پاستور Mahdie Bayat Bayat مهدیه بیات akhabiri597@yahoo.com 100319475328460029101 100319475328460029101 No Azad University, Karaj Branch دانشگاه آزاد اسلامی واحد کرج Behzad Hemati بهزاد همتی akhabiri597@yahoo.com 100319475328460029102 100319475328460029102 No Azad University, Karaj Branch دانشگاه آزاد اسلامی واحد کرج