Pejouhesh dar Pezeshki (Research in Medicine)

fa طراحی و توسعه تکنیک الایزا برای شناسایی IgG علیه نایسریا مننژیتیدیس با استفاده از تخلیص آنتی‌سرم Design and development of ELISA technique for detection of IgG against Neisseria meningitidis using purification of antisera ایمنی‌شناسی Immunology كاربردي Applicable سابقه و هدف: نایسریا مننژیتیدیس یکی از عوامل منجر به مرگ در کودکان کشورهای توسعه‌یافته است. مننگوکوک بر اساس ویژگی‌های سرولوژیکی آنتی‌ژن‌های کپسولی به 13 سروگروپ طبقه‌بندی می‌شوند. شناسایی سریع باکتری در دوره بیماری سبب انتخاب درمان ضد‌میکروبی در اسرع وقت می‌شود. هدف از این تحقیق، تهیه آنتی‌سرم علیه انواع سروگروپ‌های مننگوکوک با درجه خلوص بالا برای استفاده در تست‌های تشخیصی است. روش کار: نوع مطالعه تحقیق و توسعه است. سوسپانسیون غیرفعال شده باکتری به خرگوش سفید نیوزیلندی تزریق شد. جمع‌آوری سرم یک هفته بعد از آخرین تزریق انجام شد. خالص‌سازی با روش‌های رسوب‌دهی، تانژنشیال فلوفیلتریشن و کروماتوگرافی انجام شد. از آنتی‌سرم تولید شده در تست آگلوتیناسیون و طراحی آزمون الایزا استفاده شد. یافته‌ها: یافته‌ها نشان داد که آنتی‌سرم به دست آمده از لحاظ کیفیت (درجه خلوص بالا، بیشتر از 98درصد) و کمیت (غلظت پروتئین مناسب) از درجه بالایی برخوردار است. تست آگلوتیناسیون با آنتی‌ژن اولیه به صورت 4+ بود. غلظت‌های بهینه برای طراحی آزمون الایزا 1 و 80 میکروگرم به ترتیب برای آنتی‌بادی اولیه و بیوتینیله به دست آمد. نتایج ارزش پیشگویی مثبت یا  Positive predictive value 100 درصد و ارزش پیشگویی منفی Negative predictive value 96 درصد برای آزمون طراحی‌شده به دست آمد. نتیجه‌گیری: تشخیص سریع بیماری به وسیله آزمایش‌های مختلف مانند تست‌های سرمی که دارای حساسیت، اختصاصیت و سرعت عمل بالا و هزینه کمتری هستند، توصیه می‌شود. همچنین با توجه به درجه خلوص بالای به دست آمده در این مطالعه، می‌توان از این آنتی‌سرم در تست‌های مختلف، از قبیل آگلوتیناسیون و الایزا استفاده کرد. Background and Aim: Neisseria meningitidis is a leading cause of death in children in developed countries. Meningococcus has 13 sero-groups based on the capsule antigens. Rapid diagnosis of the bacteria results in timely selection of the right anti-microbial treatment. The present study, conducted in 2019, aimed to produce a highly pure antiserum for diagnostic assays for the detection of meningococcus sero-groups. Methods: The type of research study was research and development. Inactivated bacterial suspension was intravenously injected into white New Zealand Rabbits. Serum was collected after the last injection. Purification process was performed using precipitation, chromatography, and tangential flow filtration. The produced antiserum was used in Agglutination and ELISA assays. The purified antiserum had a purity of more than 98% at a suitable quantity. Agglutination test with the primary antigen showed 4+ result. To develop the ELISA assay, the optimized concentration of primary and biotinylated antibodies was 1 and 80 micrograms, respectively. The results of positive predictive value were 100% and negative predictive value was 96%, for the designed assay. Results: The purified antiserum had a purity of more than 98% at a suitable quantity. Agglutination test with the primary antigen showed 4+ result. To developed the ELISA assay, the optimized concentration of primary and biotinylated antibodies was 1 and 80 micrograms, respectively. The results of positive predictive value were 100% and Negative predictive value was 96%, for the designed assay. Conclusion: Serum-based assays are recommended for the timely diagnosis of the disease since these assays are specific, sensitive, inexpensive, and rapid. The antiserum produced in the present research is highly pure. Therefore, we recommend the antiserum for the development of agglutination and ELISA assays for the detection of N. meningitides. مننگوکوک؛ آنتی سرم؛ درجه خلوص بالا؛ الایزا؛ تانژنشیال فلوفیلتریشن. Meningococcus, Antisera, High purity, ELISA, Tangential Flow Filtration 30 39 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3186-1&slc_lang=fa&sid=1 Maryam Hejazi مریم حجازی 100319475328460026815 100319475328460026815 No Department of Biology, Faculty of Life Sciences, Danesh Alborz University, Qazvin, Iran.;Department of Antigen and Antisera production, Production and Research Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran. گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه دانش البرز، قزوین، ایران. ;بخش تولید آنتی‌ژن و آنتی‌سرم، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور، کرج، ایران. Mahdi Paryan مهدی پریان mparyan@gmail.com 100319475328460026816 100319475328460026816 Yes Department of Antigen and Antisera production, Production and Research Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran. بخش تولید آنتی‌ژن و آنتی‌سرم، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور، کرج، ایران. Rahman Shokri رحمان شکری 100319475328460026817 100319475328460026817 No Department of Antigen and Antisera production, Production and Research Complex, Pasteur Institute of Iran, Karaj, Iran. بخش تولید آنتی‌ژن و آنتی‌سرم، مجتمع تولیدی تحقیقاتی انستیتو پاستور، کرج، ایران.