fa تمایز ایزوله‌های کریپتوسپوریدیوم جداشده از انسان و گاوبا استفاده از قطعهbp 1055 ژن 18S rRNA بین رشته ای ( مدیریت آموزشی، تحقیقات آموزشی، آموزش پزشکی ) Interdisciplinary (Educational Management, Educational research, Statistics, Medical education پژوهشی Original سابقه و هدف: با توجه به شیوع انواع کریپتوسپوریدیوم در اشخاص با سیستم ایمنی کارآمد و ناکارآمد و ضرورت تمایز گونه‌های انسانی و حیوانی و اهمیت استفاده از ژن 18srRNA این پژوهش در شهر تهران انجام گرفت. هدف این تحقیق تمایز ایزوله‌های کریپتوسپوریدیوم جدا شده از انسان و گاو با استفاده از قطعه 1055 جفت نوکلئوتید ژن 18S rRNA بود. روش بررسی: تعداد 1020 نمونه مدفوع انسانی و940 نمونه مدفوع گاوی با استفاده از روش اسید فست اصلاح شده مورد بررسی قرار گرفت و نمونه‌های مثبت تعیین شد. DNA نمونه‌های مثبت توسط کیت Qia Amp استخراج گردید و بعد با استفاده از 4 پرایمر طراحی شده یک قطعه DNA به تعداد 1055 جفت نوکلئوتید از ژن 18s rRNA باروش Nested- PCRتکثیر شد و محصول PCR دوم برای تعیین گونه کریپتوسپوریدیوم توسط آنزیمهای Ssp1 و Vsp1 هضم شد و روی ژل آگاروز 5/2% و رنگ‌آمیزی اتیدیوم بروماید الکتروفورز گردید. یافته‌ها: در مطالعه فوق، تعداد موارد مثبت انسانی 12 و موارد مثبت گاوی 23 نمونه تعیین شد. تمامی نمونه‌های مثبت با روش مولکولی مورد بررسی قرار گرفتند و نتایج روش اول تأیید شد. همه نمونه‌های گاوی و 10 نمونه انسانی دارای حرکت الکتروفورتیک مشابه بر روی ژل آگاروز 5/2% بود که تائیدکننده گونه کریپتوسپوریدیوم پاروم گاوی بود ولی 2 نمونه انسانی دارای باندهای متفاوت بودند که تعیین سکانس شد و تمایزشان با نمونه‌های گاوی و انسانی بدست آمده تأئید گردید. نتیجه‌گیری: با وجودی که محققین در سایر کشورها کریپتوسپوریدیوم پارووم را بعنوان عامل اصلی کریپتوسپوریدیوزیس انسانی معرفی کرده‌اند، آلودگی به نوع هومینیس را نیز حائز اهمیت دانسته‌اند. در این تحقیق نیز آلودگی انسان به دو نوع کریپتوسپوریدیوم پاروم و هومینیس مشاهده شد که گونه غالب آن کریپتوسپوریدیوم پاروم بود. Background: Cryptosporidiosis is prevalent in animals and human beings, both immuno-competent and immuno-compromised persons, worldwide. Epidemiologically, it is important to differentiate between human and animal species. The aim of this study is to define the utility of a 1055 bp fragment of 18s rRNA for differentiation of Human and Cattle Cryptosporidiosis. Material and methods: 1020 human fecal samples and 940 bovine fecal samples were collected and tested for Cryptosporidium by modified acid fast staining. DNA of positive samples was extracted and a 1055bp fragment of 18s rRNA was amplified by Nested-PCR technique using 4 designed primers. The second PCR product was digested by Ssp1&Vsp1 restriction enzymes to determine the Cryptosporidium species and the results were analyzed by 2.5% agarose gel electrophoresis and visualized after ethidium bromide staining. Results: 12 human samples and 23 cattle samples were detected as being positive for Cryptospridium by modified acid fast method. These results were confirmed by molecular technique. All cattle samples and 10 human samples presented similar bands on 2.5% agarose gel which confirmed Cryptosporidium parvum except two human samples which had different patterns. On sequencing these 2 samples these two new isolates were found to be different from the rest. The sequences of 2 new human isolates were different from others in Gene Bank so they were deposited in Gene Bank at accession No: EU311203 Conclusion: In this study we detected both cryptosporidium parvum & cryptosporidium hominis in human samples but cryptosporidium parvum was more prevalent. کریپتوسپوریدیوم پاروم، کریپتوسپوریدیوم هومینیس، ژن 18S rRNA. Cryptosporidium, RNA, Polymerase Chain Reaction. 5 10 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-391&slc_lang=fa&sid=1 F Tahvildar Bidrooni فرید تحویلدار بیدرونی Dalimi4@yahoo.com 10031947532846003505 10031947532846003505 Yes A Dalimi Asl عبدالحسین دلیمی‌اصل 10031947532846003506 10031947532846003506 No B Kazemi D بهرام کاظمی دمنه 10031947532846003507 10031947532846003507 No