fa تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال شتری علیه گیرنده 2 فاکتور رشد سلول‌های آندوتلیال عروق و بررسی عملکرد آن بین رشته ای ( مدیریت آموزشی، تحقیقات آموزشی، آموزش پزشکی ) Interdisciplinary (Educational Management, Educational research, Statistics, Medical education پژوهشی Original چکیده سابقه و هدف: بخشی از آنتی‌بادی‌های شتر فاقد زنجیره سبک هستند و ناحیه اتصال به آنتی‌ژن در این نوع از آنتی‌بادی‌ها تنها دارای یک دومین می‌باشد. یکی از پروتئین‌های درگیر در آنژیوژنز گیرنده 2 فاکتور رشد سلول‌های آندوتلیال عروق (VEGFR-2) است که در تومورهای مختلف افزایش دارد و بررسی آن در سطح سلول‌ها با آنتی‌بادی در تحقیقات انجام می‌گیرد. روش بررسی: دو شتر نر توسط آنتی‌ژن VEGFR-2 ایمن شدند. برای بررسی ایمن شدن شترها تست الایزا انجام گرفت. آنتی‌بادی-های شتری توسط ستون‌های کروماتوگرافی پروتئین A و G تخلیص گردیدند. از آنتی‌بادی‌های پلی‌کلونال جدا شده در تست الایزا بر پایه سلول (Cell-based ELISA) جهت بررسی میزان بیان پروتئین VEGFR-2 در سطح سلول‌های 293/KDR، HUVECs و A431 مورد استفاده قرار گرفت. یافته‌ها: در تست الایزا، سرم شترها تا رقت 12800/1 پاسخ دادند. آنتی‌بادی‌های تک زنجیره‌ای توسط ستون‌های افینیتی کروماتوگرافی جدا شدند و در SDS-PAGE تایید شدند. در تست الایزا بر پایه سلول (Cell-based ELISA)، سلول 293/KDR نسبت به سلول HUVECs جذب نوری بالاتری داشت و در مقابل سلول A431 جذب نوری کمتری را نشان داد که دلیل آن عدم حضور VEGFR-2 در سطح این سلول می‌باشد. نتیجه‌گیری: آنتی‌بادی پلی کلونال تک زنجیره‌ای می‌تواند در طراحی کیت الایزا برای تشخیص شکل محلول این پروتئین، استفاده در فلوسیتومتری برای تشخیص سلول‌های بیان کننده این گیرنده، انجام وسترن بلاتینگ و ایمنوهیستوشیمی بر روی بافت‌ها استفاده شود. واژگان کلیدی: شتر، آنتی‌بادی تک زنجیره‌ای، آنتی‌بادی پلی‌کلونال، گیرنده 2 فاکتور رشد سلول‌های آندوتلیال عروق Abstract Background: In molecular approach, serum of camel contains a unique type of antibodies devoid of light chains since the light chain is missing, the heavy-chain antibodies should bind their antigen by one single domain, the variable domain of the heavy immunoglobulin chain. Vascular endothelial growth factor receptor-2 (VEGFR-2) is one of the important proteins in angiogenesis which over-expressed in many types of tumors. Methods: Two male dromedaries (Camelus dromedarius) were immunized against VEGFR-2. ELISA was used to evaluate the immunization process. Camel immune sera were fractionated with protein A and G affinity chromatography. Heavy chain antibodies tested for its specific reactivity in cell-based ELISA in recognition of VEGFR-2 on the cell surface of three cell lines 293/KDR, HUVECs and A431. Results: In ELISA test, the camel sera in 1/12800 dilution had the acceptable results. Furthermore, cell-based ELISA demonstrated that the polyclonal heavy chain antibodies bind to VEGFR-2 in 293/KDR and HUVECs cell lines.Conclusion: Single chain polyclonal antibodies against VEGFR-2 can be used for detection of soluble form of this protein by ELISA, and also flowcytometry, western blotting and immunohistochemistry. Keywords: Camel, Single chain antibody, Polyclonal antibody, VEGFR-2. واژگان کلیدی: شتر، آنتی‌بادی تک زنجیره‌ای، آنتی‌بادی پلی‌کلونال، گیرنده 2 فاکتور رشد سلول‌های آندوتلیال عروق Keywords: Camel, Single chain antibody, Polyclonal antibody, VEGFR-2. 93 98 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-562&slc_lang=fa&sid=1 Mahdi Behdani مهدی بهدانی 10031947532846005769 10031947532846005769 No Department of Molecular Medicine, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش پزشکی مولکولی، انستیتو پاستور ایران Morteza Karimipour مرتضی کریمی پور 10031947532846005770 10031947532846005770 No Department of Molecular Medicine, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش پزشکی مولکولی، انستیتو پاستور ایران Hossein Khanahmad Shahreza حسین خان احمد 10031947532846005771 10031947532846005771 No Department of BCG, Research-Production Branch, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش ب ث ژ، واحد تولیدی - تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران Nader Asadzadeh نادر اسدزاده 10031947532846005772 10031947532846005772 No Department of Breeding, Animal Sciences Research Institute of Iran, Tehran, Iran گروه اصلاح نژاد، موسسه تحقیقات علوم دامی کشور Keyhan Azadmanesh کیهان آزادمنش 10031947532846005773 10031947532846005773 No Department of Virology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش ویروس شناسی، انستیتو پاستور ایران Alireza Khabiri علیرضا خبیری 10031947532846005774 10031947532846005774 No Department of Mycology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش قارچ شناسی، انستیتو پاستور ایران Mehdi Habibi Anbohi مهدی حبیبی انبوهی 10031947532846005775 10031947532846005775 No National Cell bank of Iran, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش بانک سلولی، انستیتو پاستور ایران Sirous Zeinali سیروس زینلی sirouszeinali@yahoo.com 10031947532846005776 10031947532846005776 Yes Department of Molecular Medicine, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran بخش پزشکی مولکولی، انستیتو پاستور ایران