fa بررسی امکان استفاده از آنزیم‌های مختلف جهت استخراج سلول‌های بنیادی مزانشیمی از بافت چربی انسانی بین رشته ای ( مدیریت آموزشی، تحقیقات آموزشی، آموزش پزشکی ) Interdisciplinary (Educational Management, Educational research, Statistics, Medical education پژوهشی Original چکیده سابقه و هدف: با توجه به موانع کاربرد بالینی سلول‌های بنیادی جنینی در پزشکی ترمیمی و امکان استفاده از سلول‌های بنیادی بزرگسالان به ویژه سلول‌های بنیادی مزانشیمی بافت چربی، بافت چربی به عنوان منبع سلولی مناسبی جهت سلول درمانی مطرح شده است. نظر به هزینه بالای استخراج متداول این سلول‌ها از بافت چربی با استفاده از کلاژناز نوع 1 و 4، هدف از انجام این مطالعه بررسی امکان استفاده از آنزیم های مقرون به صرفه با بازدهی مناسب به عنوان جایگزینی برای این آنزیم بود. روش بررسی: فاز اول مطالعه به صورت اکتشافی انجام گرفت و در مرحله دوم، برای افتراق سلول‌های بنیادی مزانشیمی از بافت چربی انسانی مطالعه تجربی صورت گرفت. بافت چربی گرفته شده از جراحی لیپوساکشن در شرایط استریل به آزمایشگاه انتقال و مقدار مشابهی از بافت در گروه های مختلف تحت تأثیر آنزیم های مختلف در شرایط یکسان از نظر دمایی و زمانی قرار داده شد. سلول های حاصل از نظر مورفولوژی، تراکم و سرعت رشد، بیان مارکرهای سطحی ویژه و توانایی تمایز پذیری بررسی شدند. یافته‌ها: در کشت اولیه مقدار سلول استخراج شده در بین گروه ها تفاوت‌هایی را نشان داد، اما پس از اولین پاساژ، تفاوتی از نظر رشد و یا قابلیت سلول‌ها در بیان مارکرهای سطحی و تمایز پذیری مشاهده نشد. در آنالیز فلوسیتومتری، بیش از 95 درصد سلول‌ها نسبت به بیان مارکرهای مزانشیمی C‏D105 ,CD90 ,CD73 مثبت بودند. در تمامی گروه‌ها سلول‌ها قابلیت تمایز به رده‌های سلولی چربی و استخوانی را داشتند. نتیجه‌گیری: در این تحقیق برای اولین بار نشان دادیم که استخراج سلول‌های بنیادی مزانشیمی از بافت چربی انسان بدون نیاز به آنزیم کلاژناز خالص و با استفاده از آنزیم کلاژناز ترکیبی به اضافه تریپسین که به مراتب در دسترس تر و مقرون به صرفه تر است، امکان پذیر می‌باشد و توان تمایزی و کیفیت رشد سلول های حاصله مشابه با سلول های استخراج شده با استفاده از آنزیم‌های خالص است. واژگان کلیدی: سلول‌های بنیادی مزانشیمی، بافت چربی، آنزیم کلاژناز، هضم آنزیم. Abstract Background: Adipose tissue is being used word-wide as a suitable adult stem cell source the aim of this study was to examine the possibility of using different enzymes to isolate the human mesenchymal stem cells from adipose tissue. Methods: Adipose tissues which were obtained from liposuction surgery were transferred to the laboratory under sterile conditions. All samples obtained from different sources were treated with different enzymes under similar conditions of time and temperature. The cells were assessed for their morphology, density and rate of growth, expression of the specific surface markers, and differentiation abilities. Results: Regardless of the employed enzymes, cells isolated in the primary cultures showed different morphologies. However following the next subcultures, homogenic populations of cylindrical cells were dominant. In the fourth passage, no differences were observed between different groups in growth rate and the ability of the cells in expression of specific surface markers and differentiation ability into adipose and osteocyte cells. Flow cytometry analysis showed that more than 95% of the cells were positive for the expression of CD73, CD90 and CD105 mesenchymal markers. Conclusion: Results of this study have demonstrated that wild type collagenase combined with trypsin can be used to isolate the human mesenchymal stem cells from adipose tissue with the same outcome as using pure collagenase, thus reducing the high expense of enzymatic dissociation with pure collagenase. Keywords: Mesenchymal stem cells, Adipose tissue, Collagenase enzyme, Enzymatic dissociation. واژگان کلیدی: سلول‌های بنیادی مزانشیمی، بافت چربی، آنزیم کلاژناز، هضم آنزیم. Keywords: Mesenchymal stem cells, Adipose tissue, Collagenase enzyme, Enzymatic dissociation. 200 208 http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1-581&slc_lang=fa&sid=1 Mahshid Elahi مهشید الهی 10031947532846006012 10031947532846006012 No Member of Young Researchers Club, Islamic Azad University, Damaghan Branch, Damaghan, Iran عضو باشگاه پژوهشگران جوان، دانشگاه آزاد آسلامی، واحد دامغان Maryam Kabir Salmani مریم کبیرسلمانی maryam@nigeb.ac.ir 10031947532846006013 10031947532846006013 Yes Department of Cellular and Molecular Researches, Shahid Beheshti University of Medical sciences, Tehran, IranDepartment of Molecular Genetics, National Institute of Genetics Engineering and Biotechnology, Tehran, Iran گروه ژنتیک مولکولی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوریبخش تحقیقات سلولی و مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی Abdolhossen Shiravi عبدالحسین شیروی 10031947532846006014 10031947532846006014 No Islamic Azad University, Damaghan Branch, Damaghan, Iran دانشگاه آزاد اسلامی، واحد دامغان