جلد 37، شماره 4 - ( 12-1392 )                   جلد 37 شماره 4 صفحات 211-219 | برگشت به فهرست نسخه ها


XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Heidari-Keshel S, Zandian S, Ghasemvand F, Rahman zadeh S, manzad M, Nezafat N. Cloning and codon optimization of phenylalanine dehydrogenase gene in Escherchia colihost and comparison of gene expression in T7 &λPR promoters. Research in Medicine. 2014; 37 (4) :211-219
URL: http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/article-1-1251-fa.html
حیدری کشل سعید، زندیان صنم، قاسم وند فریبا، رحمان زاده سعید، ایمان‌زاد معصومه، نظافت نوید. کلونینگ و بهینه سازی کدون ژن فنیل آلانین دهیدروژناز در سیستم بیانی E.coli و مقایسه بیان ژن با دو پروموتور T7 و λPR. پژوهش در پزشکی. 1392; 37 (4) :211-219

URL: http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/article-1-1251-fa.html


آزمایشگاه تکنولوژی آنزیم، گروه بیوشیمی، انستیتو پاستور ایران ، navidnezafat@yahoo.com
چکیده:   (3861 مشاهده)
چکیده سابقه و هدف: یکی از کاربردهای پزشکی آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز، تعیین مقدار دقیق سطح L- فنیل آلانین در سرم خون افراد جهت شناسایی بیماران مبتلا به بیماری فنیل کتونوریا می‌باشد. در این مطالعه، میزان بیان پروتئین مورد نظر بعد از بهینه سازی کدون ژنی (pdh ) در دو ناقل بیانی pET-23a و pPR37 در میزبان بیانی E.coli بررسی شد. روش بررسی: در این تحقیق تجربی، از ژن فنیل آلانین دهیدروژناز (pdh) بهینه سازی شده مربوط به باکتری B. Sphaericus استفاده شد که در دو ناقل بیانی pET-23a و pPR37 کلون گردید. بیان ژن pdh در ناقلین بیانی pET-23a و pPR37 به ترتیب با افزودن القاگر شیمیایی IPTG(1mM) و تغییر دمایی 30 به 42 درجه سانتی‌گراد صورت گرفت. بهینه سازی کدون با نرم افزار Jcat انجام گرفت . آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز(PheDH) با استفاده از ستون کروماتوگرافیNi-NTA تخلیص گردید. در ادامه با SDS-PSGE 10% وزن مولکولی نسبی زیر واحد PheDH را در حدود KDa 41 نشان داده شد. همچنین خلوص و میزان پروتئین توسطSDS-PAGE تعیین گردید. یافته‌ها: بیشترین میزان بیان 8 ساعت بعد از القاء در سازه pETpdh/ BL21(DE3)plysS مشاهده شد، در حالی که میزان بیان در همان مدت زمان در سازه دیگر بسیار پایین بود. فعالیت ویژه آنزیم بعد از به کار گیری روش تخلیصی U/mg 705 از پروتئین محاسبه شد. بیان پروتئین مورد نظر بعد از بهینه سازی کدون و در سازه ژنی pETpdh بیشتر بود. نتیجه‌گیری: با توجه به مقایسه دو سازه ژنی در بیان پروتئین مورد نظر، سازهpETpdh احتمالاًجهت تولید آنزیم PeDH در مقیاس بالا مناسب‌تر بوده و بر اساس این تحقیق برای این کار توصیه می‌گردد. واژگان کلیدی: فنیل آلانین دهیدروژناز، بیان، پلاسمید، پروموتور.
متن کامل [PDF 498 kb]   (2227 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشی | موضوع مقاله: سلولی و مولکولی
دریافت: ۱۳۹۳/۲/۱۳ | پذیرش: ۱۳۹۳/۲/۱۳ | انتشار: ۱۳۹۳/۲/۱۳

ارسال پیام به نویسنده مسئول


Creative Commons License
This Journal is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License | Research in Medicine

Designed & Developed by : Yektaweb