جلد 34، شماره 2 - ( 5-1389 )                   جلد 34 شماره 2 صفحات 123-127 | برگشت به فهرست نسخه ها


XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Nekoeian S, Haghighi A, Kazemi B, Seyyed Tabaei S J, Taghipour N, Rast S. Expression of a recombinant serine-rich Entamoeba histolytica protein (SREHP). Research in Medicine. 2010; 34 (2) :123-127
URL: http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/article-1-765-fa.html
نکوئیان شهرام، حقیقی علی، کاظمی بهرام، سید طبایی سیدجواد، تقی پور نیلوفر، راستی سیما. بیـان پروتئین نوترکیب غنی از سـرین انتـامبا هیستولیتیکا. پژوهش در پزشکی. 1389; 34 (2) :123-127

URL: http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/article-1-765-fa.html


، ahaghighi@sbmu.ac.ir
چکیده:   (10919 مشاهده)
چکیده سابقه و هدف: استفاده از شاخص های آنتی ژنیک انتامباهیستولیتیکا مانند آنتی ژن پروتئین غنی از سرین انتامباهیستولیتیکا SREHP)) جهت تهیه واکسن، برسی تنوع ژنتیکی و تشخیص قطعی و افتراق آن از انتامبا دیسپار کاربرد بیشتری پیدا کرده است. این مطالعه با هدف بیان پروتئین نوترکیب غنی از سرین انتامبا هیستولیتیکا به منظور استفاده در کیت تشخیصی الایزا انجام شد. روش بررسی: در این تحقیق که یک روش توصیفی از نوع اکتشافی است، ابتدا ژن SREHP ایزوله ایرانی که قبلاً در پلاسمید بلواسکریپت (pBSc) کلون شده بود، با استفاده از آنزیم BamHI جدا گردید و پس از تخلیص از ژل در پلاسمید بیانی pET32a کلون شد. از روش های غربالگری شامل روش سریع (Quick check) با استفاده از محلول Rosconis، PCR با پرایمرهای اختصاصیSREHP و pET و برش آنزیمی با آنزیم های BamHI و HindIII جهت تایید کلونینگ استفاده شد. ترادف نوکلئوتیدهای ژن با روش سکوئنسینگ تعیین گشت و پلاسمید نوترکیب حاوی ژن SREHP جهت تکثیر به سلول پذیرای BL21(DE3) انتقال یافت. در نهایت ازکلنی حاوی پلاسمید نوترکیب کشت انبوه تهیه شد و پروموتور ژن با IPTG القا و وجود پروتئین نوترکیب برروی ژل SDS-PAGE بررسی گردید. یافته ها: ژن SREHP در پلاسمید بیانی pET32a ساب کلون گردید و صحت کلونینگ با روش های غربالگری سریع (Quick check)، PCR با پرایمر های اختصاصیSREHP و pET T7 promoter و برش آنزیمی با آنزیم های BamHI و HindIII تایید شد. ترادف نوکلئوتیدهای ژن با اندازه 666 نوکلئوتید تعیین گشت و ژن کلون شده در پلاسمید بیانی در حضورIPTG در مدت زمان 5 ساعت در محیط کشت ابراز شد. وجود پروتئین نوترکیب غنی از سرین انتامبا هیستولیتیکا به انضمام تیوردوکسین (Trx-Tag) موجود درpET32a با وزن ملکولی 44 کیلودالتونی در کنار مارکر برروی ژل SDS-PAGE مشاهده و مورد تایید قرار گرفت. نتیجه گیری: با توجه به کاربرد زیاد پروتئین نوترکیب غنی از سرین انتامباهیستولیتیکا در تهیه کیت های تشخیصی و تهیه واکسن از آن علیه تک یاخته انتامباهیستولیتیکا، در این مطالعه پروتئین سرین ریچ (SREHP) با موفقیت بیان شد. واژگان کلیدی: انتامبا هیستولیتیکا، پروتئین نوترکیب غنی از سرین، SREHP.
متن کامل [PDF 479 kb]   (2463 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشی | موضوع مقاله: انگل شناسی
دریافت: ۱۳۸۹/۱۰/۷

ارسال پیام به نویسنده مسئول


Creative Commons License
This Journal is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License | Research in Medicine

Designed & Developed by : Yektaweb