جلد 37، شماره 4 - ( 12-1392 )                   جلد 37 شماره 4 صفحات 211-219 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


آزمایشگاه تکنولوژی آنزیم، گروه بیوشیمی، انستیتو پاستور ایران ، navidnezafat@yahoo.com
چکیده:   (5499 مشاهده)
چکیده سابقه و هدف: یکی از کاربردهای پزشکی آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز، تعیین مقدار دقیق سطح L- فنیل آلانین در سرم خون افراد جهت شناسایی بیماران مبتلا به بیماری فنیل کتونوریا می‌باشد. در این مطالعه، میزان بیان پروتئین مورد نظر بعد از بهینه سازی کدون ژنی (pdh ) در دو ناقل بیانی pET-23a و pPR37 در میزبان بیانی E.coli بررسی شد. روش بررسی: در این تحقیق تجربی، از ژن فنیل آلانین دهیدروژناز (pdh) بهینه سازی شده مربوط به باکتری B. Sphaericus استفاده شد که در دو ناقل بیانی pET-23a و pPR37 کلون گردید. بیان ژن pdh در ناقلین بیانی pET-23a و pPR37 به ترتیب با افزودن القاگر شیمیایی IPTG(1mM) و تغییر دمایی 30 به 42 درجه سانتی‌گراد صورت گرفت. بهینه سازی کدون با نرم افزار Jcat انجام گرفت . آنزیم فنیل آلانین دهیدروژناز(PheDH) با استفاده از ستون کروماتوگرافیNi-NTA تخلیص گردید. در ادامه با SDS-PSGE 10% وزن مولکولی نسبی زیر واحد PheDH را در حدود KDa 41 نشان داده شد. همچنین خلوص و میزان پروتئین توسطSDS-PAGE تعیین گردید. یافته‌ها: بیشترین میزان بیان 8 ساعت بعد از القاء در سازه pETpdh/ BL21(DE3)plysS مشاهده شد، در حالی که میزان بیان در همان مدت زمان در سازه دیگر بسیار پایین بود. فعالیت ویژه آنزیم بعد از به کار گیری روش تخلیصی U/mg 705 از پروتئین محاسبه شد. بیان پروتئین مورد نظر بعد از بهینه سازی کدون و در سازه ژنی pETpdh بیشتر بود. نتیجه‌گیری: با توجه به مقایسه دو سازه ژنی در بیان پروتئین مورد نظر، سازهpETpdh احتمالاًجهت تولید آنزیم PeDH در مقیاس بالا مناسب‌تر بوده و بر اساس این تحقیق برای این کار توصیه می‌گردد. واژگان کلیدی: فنیل آلانین دهیدروژناز، بیان، پلاسمید، پروموتور.
متن کامل [PDF 498 kb]   (3884 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشی |
دریافت: ۱۳۹۳/۲/۱۳ | پذیرش: ۱۳۹۳/۲/۱۳ | انتشار: ۱۳۹۳/۲/۱۳