جلد 30، شماره 3 - ( پاییز 1385 )                   جلد 30 شماره 3 صفحات 245-252 | برگشت به فهرست نسخه ها


XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Nejad Moghaddam M, Modarresi M, BabaShamsi M, Chamankhah M. Streptokinase: extraction, cloning and overexpression of recombinant. Research in Medicine. 2006; 30 (3) :245-252
URL: http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/article-1-321-fa.html
نژاد مقدم محمدرضا، مدرسی سیدمحمدحسین، باباشمسی محمد، چمن‌خواه محمود. استرپتوکیناز: استخراج،کلون‌سازی و بیان بالای پروتئین نوترکیب فعال. پژوهش در پزشکی. 1385; 30 (3) :245-252

URL: http://pejouhesh.sbmu.ac.ir/article-1-321-fa.html


، babashams@avesina.ac.ir
چکیده:   (17742 مشاهده)
چکیده سابقه و هدف: استرپتوکیناز به عنوان شناخته‌شده‌ترین داروی فیبرینولیتیک، مدت مدیدی است در درمان سکته قلبی استفاده می‌شود. ویژگیهای ساختاری ساده این پروتئین زمینه لازم برای دستیابی به انواع نوترکیب آن را فراهم ساخته است. هدف از این تحقیق تهیه سوش استرپتوکوک equisimilis H46A (پربازده از نظر تولید استرپتوکیناز) برای اولین بار در ایران بود تا پس از استخراجDNA ، ژن استرپتوکیناز بگونه‌ای تکثیر شود که امکان کلون‌سازی آن در حاملهای متعدد بوجود آید. روش بررسی: پس از استخراجDNA ژنومی ژن استرپتوکیناز از دو ناحیه با استفاده از دو پرایمر بالادست و یک پرایمر پایین‌دست ضمن در نظر گرفتن یک جایگاه آنزیم برش‌دهنده معمول برای دو سر محصولات (کل ORF، bp 1323 و قسمت مربوط به پروتئین بالغ، bp 1245) تکثیر شد و در حامل pGEX-4T-2 تحت پروموتور قوی t‏ac و قابلیت بیان بالا کلون شد. پلاسمید نوترکیب حاصل بوسیله عملیات هضم دو طرفه و تعیین توالی، تأیید و در اشریشیاکلی سویهBL21(DE3 )plysS´ ترانسفورم شد. میزان بیان و فعالیت استرپتوکیناز نوترکیب مربوط به کلون واجد قطعه bp1245 با استفاده از دانسیتومتر لیزری و تست اختصاصی با سوبسترایS2251 در مقایسه با یک نمونه استرپتوکیناز خارجی مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته‌ها: استفاده از یک آنزیم برش‌دهنده برای دو سر قطعه ژن، کلون‌شدن آن‌را در تعداد زیادی از حاملهای بیانی امکان‌پذیر ساخت. میزان بیان پروتئین نوترکیب به بیش از 45% کل پروتئینهای میزبان، موفقیت در کلون‌سازی را تأیید کرد. وجود دم اتصالی گلوتاتیون S ترانسفراز(GST) مانع فعالیت استرپتوکیناز نشد و مقدار آن بدون بهینه‌سازی و تخلیص شرایط کشت بیش از u/ml15000از کشت ثبت شد. نتیجه‌گیری: استفاده از حاملpGEX-4T-2 ضمن تولید استرپتوکیناز نوترکیب فعال و با بازدهی فراوان، دم GST را نیز به ابتدای آمینی آن اضافه می‌کند که می‌توان از آن برای تخلیص یک مرحله‌ای و آسان با استفاده از لیگاند گلوتاتیون سود برد.
متن کامل [PDF 403 kb]   (5885 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشی | موضوع مقاله: عمومى
دریافت: ۱۳۸۶/۵/۱۳

ارسال پیام به نویسنده مسئول


Creative Commons License
This Journal is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License | Research in Medicine

Designed & Developed by : Yektaweb